THESE Anne POSTEC Diversité de populations microbiennes ...

Matériel et méthodes
2.3.3 Conditions des cultures d’enrichissement réalisées en bioréacteur gas-lift.
Deux cultures d’enrichissement ont été réalisées, à 90°C et 60°C, sur une période de
45 et 50 jours respectivement. Les milieux ont été inoculés à 2% avec l’échantillon de
cheminée AT2E1-8. Les cultures ont été réalisées à pH 6,5 et en présence d’un balayage
gazeux à l’azote de 0.1 v.v.m -1 (volume de gaz par volume de milieu et par minute),
correspondant à un débit de 200 mL. min -1 . Le choix de l’azote a été guidé par une étude de
l’archée hyperthermophile anaérobie Pyrococcus furiosus cultivée en fermenteur gas-lift qui
montrait que la densité cellulaire la plus élevée (3. 10 9 cellules. mL -1 ) était obtenue avec
l’azote (N 2 ) par rapport à d’autres gaz inertes (Ar, He, SF 6 ) (Raven et al. 1992). Le balayage
gazeux le plus faible possible a été appliqué à nos cultures afin de maintenir l’anaérobiose,
d’éliminer les produits volatiles de fermentation potentiellement toxiques (H 2 et H 2 S entre
autres) tout en minimisant les forces de cisaillement.
Pour chaque culture, une période initiale de batch de 34 h a été maintenue. La
culture en continu a ensuite été établie par application d’un taux de dilution du milieu frais de
0,04 h -1 , correspondant à un débit de 80 mL. h -1 . Ce taux de dilution correspond aussi à un
temps de renouvellement du milieu (i.e. le passage de 2 L de milieu) de 25 h. En fin de
culture, l’effet du changement d’un paramètre sur la communauté microbienne cultivée a été
testé : l’augmentation du débit par palier dans le cas de la culture à 90°C, ou l’augmentation
de la température dans le cas de la culture à 60°C (voir Résultats).
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