cache

26
นําไปวัดคาการดูดกลืนของแสง ที่ความยาวคลื่น 760 nm เปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐานของ
gallic acid ตามวิธีมาตรฐานในการวิเคราะหปริมาณฟนอลิกทั้งหมด หนวยที่วัดไดเปน mg gallic
acid equivalent (mgGAE) หรือ มิลลิกรัมตอน้ําหนักสด
5. การวิเคราะหปริมาณและชนิดของกรดไขมัน (ตามวิธีของ AOAC, 1995)
5.1 การสกัดไขมันจากตัวอยางพืช
ชั่งตัวอยางที่บดละเอียดแลว 5 กรัม ใสลงในหลอดที่มีฝาปด เติมสารละลาย
คลอโรฟอรม-เมทานอล (2 :1) ปริมาตร 30 mL เขยาอยางแรงเพื่อใหเกิดการสกัดที่สมบูรณกรอง
สารละลายผานกระดาษกรอง Whatman No.1 แลวนํากากที่ไดมาสกัดซ้ําอีกสองครั้งดวย
สารละลายและปริมาตรเทาเดิม รวมสารละลายที่กรองไดเทลงในกรวยแยก (separatory funnel)
แลวทิ้งไวใหแยกชั้นเก็บสารละลายสวนชั้นลาง ลงในขวดกนกลม (round-bottom flask) ที่ทราบ
น้ําหนักแลว นําไประเหยใหแหงดวย เครื่อง rotary evaporator ใน water bathโดยใชอุณหภูมิ
40 o ซ จนกระทั่งสารแหง นําไปชั่งน้ําหนัก จะได ปริมาณ total fat แลวละลายดวยคลอโรฟอรม
ใหไดความเขมขนประมาณ 30 มิลลิกรัมตอมิลลิลิตร
5.2 การเตรียมตัวอยางเพื่อวิเคราะหชนิดไขมันดวยเครื่อง gas chromatography (GC)
ดูดสารละลายที่สกัดได 1 mL ลงในขวดกนกลมขนาด 250 mL ระเหยใหแหงภายใต
กระแสไนโตรเจน แลวเติม 0.5 M NaOH ใน เมทานอล 4 mL และ internal standard (C23:0) ที่
เตรียมใน dichloromethane 1 mL เขยาใหเขากันนานประมาณ 30 วินาที นําไปรีฟลักซ (reflux) ที่
อุณหภูมิ 100 o ซ นาน 5 นาที ใน water bath shaker ตั้งทิ้งไวใหเย็น เติม 14% borontrifluoridemethanol
(BF3 –Methanol) 2 mL นําไป reflux ซ้ําที่สภาพเดิม นาน 15 นาที ตั้งทิ้งไวใหเย็น แลว
เติมสารละลายเกลืออิ่มตัว (NaCl) 10 mL เขยาใหเขากัน แลวสกัดตอดวยสารละลาย petroleum
ether (iso-octane(2,2,4-trimetylpentane)) 5 mL สกัด 3 ครั้ง เก็บสารละลายสวนชั้นบน ลงในขวด
กนกลม นําไประเหยใหแหงโดยใชอุณหภูมิ 40 o ซ จากนั้นละลายสารดวย คลอโรฟอรม 1 mL
กรองสารละลายที่ไดผาน nylon filter membrane มีขนาด pore size 0.45 μm แลวนําไปวิเคราะห
ดวยเครื่อง GC