cache

30
6.2.5 กิจกรรมเอนไซม PAL ดัดแปลงจากวิธีของ Gang et al. (2001)
เตรียมกราฟมาตรฐานของ trans-cinnamic acid โดยวัดคาการดูดกลืนของแสง
ที่ความยาวคลื่น 290 nm บันทึกกราฟเสนตรงที่ไดเพื่อนําไปเปรียบเทียบหาปริมาณผลิตภัณฑที่ได
จากปฏิกิริยาของเอนไซมในการทดลอง ปฏิกิริยาในหลอดทดลองประกอบดวย สารละลาย
บัฟเฟอร Tris ความเขมขน 50 mM pH 8.8 และสารสกัดเอนไซมจากพืช เติมสารตั้งตน L-
phenylalanine ความเขมขน 12 mM วัดคาความยาวคลื่นที่ 290 nm เปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐาน
และวัดปริมาณโปรตีนดวยวิธี Bradford (1976) คาที ่วัดไดเปนนาโนโมลตอชั่วโมงตอมิลลิกรัม
โปรตีน หรือหนวยปฏิกิริยาของ PAL ตอมิลลิกรัมโปรตีน
การทดลองที่ 2 ศึกษาวิธีการลดอาการสะทานหนาวในพืชสกุลกะเพรา
จากผลการทดลองที่ 1 ใบแมงลักเปนพืชสกุลกะเพราชนิดที่มีความไวตออาการสะทาน
หนาวมากที่สุดและมีการตอบสนองตออาการสะทานหนาวใบออนและใบแกแตกตางกัน
2.1 การรมดวย 1-methylcyclopropene (1-MCP)
นําตะกราที่บรรจุดวยกิ่งแมงลัก มารมดวยไอของสารเคมี ในตูรมพลาสติกที่มีปริมาตร
0.07 ลูกบาศกเมตร คํานวณปริมาณสาร 1-MCP ใหมีความเขมขน 100 500 1,000 และ 2,000 nL L -1
ใชเวลารมนาน 4 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิหอง โดยมีอากาศปกติเปนชุดควบคุม ทดลอง 3 ซ้ําๆ ละ 15 กิ่ง
นําไปเก็บไวที่ 4 o ซ ประเมินอาการสะทานหนาวของใบออนและใบแกทุก 12 ชั่วโมงจนครบ 48
ชั่วโมง เลือกชนิดของสารและความเขมขนที่มีผลตอการชะลอการเกิดอาการสะทานหนาวทดสอบ
ซ้ํา นําไปเก็บไวที่ 4 o ซ ประเมินอาการสะทานหนาวในใบแกและวัดคาการรั่วไหลของประจุ
2.2 การใชสาร salicylic acid (SA)
การใหสารละลาย SA โดยการจุมทั้งกิ่งพืชลงในสารละลาย ความเขมขน 0 0.25 0.5
1.0 และ 2.0 mM เปนเวลานาน 5 นาที แลวปลอยใหแหงกอนบรรจุในถุงพลาสติกเจาะรู แลวนําพืช
ทดลองไปเก็บไวที่อุณหภูมิ 4 o ซ นาน 24 ชั่วโมง บันทึกคะแนนอาการสะทานหนาวที่เกิดขึ้นทั้งใน
ใบแกและใบออน เลือกความเขมขนและระยะความแกที่มีผลตอการชะลอการเกิดอาการสะทาน
หนาวมาทดสอบซ้ํา โดยตัดใบ จํานวน 10 ใบตอซ้ํา ทดลอง 3 ซ้ําตอการทดลอง นําสวนของกานใบ