cache

80
5.2 ยีนที่ควบคุมการผลิตเอนไซม polyphenol oxidase ในใบกะเพรา (Ocimum. sanctum)
ออกแบบ degenerate primer จํานวน 1 คู เสน PPO_LEFT (forward) 5 / -TYC ACA
ACT CHT GGC TCT TCY TC-3 / และเสน PPO_RIGHT (reverse) 5 / -NGA RTA RAA RTT
SCC CAT GTC YT-3 / หลังการทํา PCR ได product ขนาดประมาณ 500 คูเบส (ภาพผนวกที่ 3)
นํา PCR ที่ได ผานขั้นตอนการ cloning พบวาเปนโคลนใหมตั้งชื่อวา OcPPO (EU139474) นํา
ลําดับเบสเขาโปรแกรม Blastn พบวาลําดับเบสมีความคลายคลึงกับยีน PPO ของ Populus
trichocarpa (AC185364) 91%, Ipomoea batatas (AY822711) 81%, Pyrus pyrifolia
(AB056680) 76%, Prunus mexicana (DQ851217) 72% ซึ่งมีลําดับของนิวคลีโอไทดและลําดับ
ของกรดอะมิโน ดังภาพที่ 26 และ 27
1 CCCTTCCACA GATATTATCT CTACTTCTTC GAGAGAATCT TGGGGAAGCT GATCGACGAT
61 CCCACCTTCG CCATGCCCTT CTGGAACTGG GATTCCCCCG CCGGTATGCA GATCCCGTCT
121 CTCTACACCA ACCCGAACTC CGCCTTGTAC GACCGGTTTC GCGACAAGGC GCATCAGCCG
181 CCGGCCGTCG TCAATCTCAA CTTCAGCGGC GACGCGAACA CCACCGCCGA TCAGCAAATG
241 AAGACAAACT TGACGGTAAT GTACAGGCAA ATGGTGTCCA ACTCGAAGAC TCCCCGTCTT
301 TTCTTCGGCA GTCCTTACCG CCGCGGCGAG GATCCCAACC CTGGATCCGG TTCGATCGAG
361 GGTATCCCTC ACGGCCCGGT TCATGTCTGG ACCGGAGACA GCACCCAACC GAATACA
ภาพที่ 26 ลําดับนิวคลีโอไทดยีน OcPPO ที่แยกไดจากใบแมงลัก ความยาว 417 คูเบสและใช
ออกแบบโพรบและไพรเมอร สําหรับ semi-PCR
1 PFHRYYLYFFERILGKLIDDPTFAMPFWNWDSPAGMQIPSLYTNPNSALYDRFRDKAHQPPAVVN
66 LNFSGDANTTADQQMKTNTVMYRQMVSNSKTPRLFFGSPYRRGEDPNPGSGSIEGIPHGPVHVW
130 TGDSTQPNT 139
ภาพที่ 27 ลําดับกรดอะมิโนของยีน OcPPO ที่แปลรหัสจากนิวคลีโอไทดของยีน OcPPO