Guia Clínica de l'HIV 2003 - Sida Studi

uiz.qxd 4/03/03 06:34 Página 340Assaig LIPA HIV-1 RTEl test LIPA HIV-1 RT consisteix en un principi d’hibridació inversa. Primer,el gen de la transcriptasa inversa ha de ser amplificat a partir deplasmes o cèl·lules mononuclears de sang perifèrica del pacient. El DNA,que ha estat prèviament marcat amb biotina, hibrida amb sondes específiquesimmobilitzades en una membrana de nitrocel·lulosa. Després de lahibridació, s’hi afegeix estreptoavidina i fosfatasa alcalina que s’unirà alcomplex DNA+sonda. La incubació amb un compost cromògen dóna pasa un precipitat de color púrpura. Aquest mètode permet la detecció demúltiples mutacions associades amb resistències a antiretrovirals que inhibeixenla transcriptasa inversa, utilitzats en el tractament de la infeccióper l’HIV-1. Aquesta tècnica és una eina idònia per a l’anàlisi ràpida demutacions preexistents en pacients sense experiència prèvia al tractamentantiretroviral. A més, l’assaig LIPA mostra una gran sensibilitat per a ladetecció, en algunes mostres, d’espècies minoritàries en una poblacióviral. No obstant això, en d’altres mostres la presència de polimorfismespot interferir en la hibridació i no proporcionar resultats.Tècniques fenotípiquesMètode de sensibilitat del virusen les cèl·lules mononucleades de sang perifèricaEl mètode clàssic per a la determinació de la sensibilitat del virus a undeterminat fàrmac està basat en les cèl·lules mononucleades de sangperifèrica, a partir de les quals es valoren les resistències de la poblacióproviral. Les cèl·lules mononucleades de sang perifèrica del pacient sóncultivades amb cèl·lules de donant sa i seronegatiu per l’HIV per així obtenirla població viral que té el pacient, que a la vegada utilitzaran ulteriormentper a l’assaig de sensibilitat.La sensibilitat a un fàrmac es determina afegint a cèl·lules de donantuna concentració estàndard de virus obtinguts prèviament en presènciade concentracions creixents del fàrmac. La producció de virus en presèn-340