Progetto Co.Al.Ta. II Sintesi dei risultati - Cra

Damiani.qxp 25/02/2008 10.08 Pagina 77
Introduzione
La valorizzazione del carciofo di Pietrelcina è una
delle strategie proposte nel progetto COALTA1 per
sostituire la coltivazione del tabacco nell'area del
beneventano. Tale coltura diffusa da oltre un secolo
nella zona presenta due significative caratteristiche
che la rendono particolarmente interessante: la
tardività che gli permette di fornire prodotto in un
periodo in cui il carciofo locale è assente e l'alto
contenuto di inulina che lo rendono particolarmene
adatto per la terapia di disfunzioni meataboliche
dei lipidi e dei glucidi (del Piano et al., 2006).
L'analisi di tali caratteristiche in carciofaie della
zona ha mostrato tuttavia una variabilità tra ed
entro carciofaie che giustifica ulteriori studi per
caratterizzare la variabilità entro piante dell'accessione
e per definire un genotipo tipico di
Pietrelcina che si disitngua anche molecolarmente
dal carciofo Romanesco da cui indubitabilmente
deriva. Lo scopo di tale lavoro è stato quindi lo studio
tramite marcatori molecolari della variabilità
genetica della specie Cynara scolymus L. con l'intento
applicativo di definire un pattern molecolare
distintivo di cv locali campane.
Materiali e metodi
E' stato estratto il DNA da 66 piante: 38 piante da
13 aziende della zona di Pietrelcina, 6 dell'ecotipo
Pietrelcina conservato presso la banca del germoplasma
del CRPV di Sassari (piante 7.x), 16 di carciofo
Capuanello da due aziende (piante 5.x e 6.x), 4 di
Romanesco recuperate in centro e sud Italia (9.x e
4.x), e due altre piante fuori tipo (8 ecotipo Scafati e
10 allungato umbro). L'analisi molecolare è stata
eseguita valutando il polimorfismo di regioni microsatellitarie
e il polimorfismo generato con la tecnica
AFLP (Vos et al., 1995) utilizzando una sola coppia
di primer derivati dalla restrizione con gli enzimi
EcoRI e MseI ed utilizzando le basi selettive ACT e
CAA ai due rispettivi siti di taglio. E' stata anche
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Caratterizzazione molecolare di accessioni di carciofo di
Pietrelcina
Taviani P, Menconi L, Rubini A, Cozzolino E 1 , Leone V 1 , Damiani F
Istituto Genetica Vegetale CNR via Madonna Alta 130, 06128
Perugia 075 5014862, fax 0755014869,
francesco.damiani@igv.cnr.it;
1Unità di ricerca per le colture alternative al tabacco CRA, via
Vitiello 116, 84018 Scafati (SA)
applicata la tecnica S-Sap che consiste nell'amplificazione
di DNA ristretto con un primer ancorato al
sito di taglio ed uno ricavato dalla sequenza di un
retrotrasposone endogeno. Per l' S-Sap sono stati utilizzati
primer ancorati al sito di taglio MseI aventi le
basi selettive CAA, CAC e CAT in combinazione
con un primer disegnato sul retrotrasposone
CYRE5 (Acquadro et al., 2006). Nell'analisi dei
risultati, i profili di ogni combinazione di primers
sono stati riportati come dati di presenza assenza
della banda per ogni campione costruendo una
matrice binaria unica per S-SAP e AFLP, da cui è
stata calcolata la matrice delle distanze genetiche
con l'indice di Nei, seguita da una analisi cluster con
il metodo UPGMA e rappresentata graficamente da
un dendrogramma elaborato con il software
NTSYS-pc (Rohlf, 1993). Per l'analisi dei microsatelliti
ci si è basati sulle tecniche ed i primer sviluppati
in carciofo da Acquadro et al (2003; 2005).
Sono state utilizzate 12 combinazioni di primer SSR
e per ogni coppia di primer è stato mantenuto il
nome del codice del locus. Per un confronto diretto
dei risultati ottenuti con i marcatori "multi-locus"
(S-SAP e AFLP) e a "singolo locus" (SSR) è stata
eseguita un'analisi di raggruppamento cluster con
relativo dendrogramma anche dalla matrice della
distanza genetica costruita con i marcatori SSR. Le
due matrici sono state quindi combinate e con le
stesse modalità si è costruito un dendogramma complessivo
della variabilità genetica osservata.
Risultati
Dall'analisi AFLP e S-SAP si sono ottenute 141
bande polimorfiche, mentre l'analisi SSR condotta
su 12 loci ha evidenziato la presenza di un totale di
26 alleli. Di questi, 3 alleli sono presenti in tutte le
piante del controllo Pietrelcina (piante 7.x) e non
condivisi con altre accessioni ad eccezione di uno
con la n. 10. I dendogrammi ottenuti dall'analisi di
similarità con i due tipi di marcatori danno risultati
molto simili e l'ulteriore elaborazione ottenuta
raggrupando tutti i dati è riportata in fig. 1.
Solo due accessioni ( n.7 e n. 6) risultano omogenee
e distinguibili, le 38 piante collezionate nella
zona di Pietrelcina sono alquanto eterogenee,