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I(M) [%]
normalis. w(M)
S(V e
)
I(V e
) [%]
V ( M )
e
I V
Gleichung 13
e
0
S V
S V
e
e
dV
dV
e
e
V e (M) bedeutet das Elutionsvolumen der Moleküle mit dem gewählten Molekulargewicht M.
I(V e ) gibt den Flächenanteil der Moleküle wieder, die ein Elutionsvolumen größer als V e (M)
haben. Wenn die Moleküle ein Elutionsvolumen größer als V e (M) besitzen, müssen sie bei
Vorliegen eines SEC-Mechanismus ein kleineres Molekulargewicht als M aufweisen. Wenn
der Detektor konzentrationsabhängig ist, d.h. das Detektorsignal proportional zur
Probenkonzentration ist, gilt I(M) gleich I(V e ). So erhält man eine Abhängigkeit zwischen
Molekulargewicht und Elutionsvolumen, wodurch eine Kalibrationskurve resultiert.
100
1.0
100
0.012
80
0.8
0.010
80
60
0.6
0.008
60
0.006
40
0.4
40
0.004
20
0.2
0.002
20
0
1000 10000 100000
M [g/Mol]
0.0
0.000
20 22 24 26 28 30 32
V e
[mL]
0
Abbildung 10: Schematische Darstellung der integralen Kalibration.
Statische Lichtstreuung
Um ohne eine Kalibration absolute Molekulargewichte zu bestimmen können
molmassensensitive Detektoren wie z.B. Lichtstreudetektoren in der SEC verwendet werden.
Durch Kopplung eines Konzentrationsdetektors mit einem Lichtstreudetektor werden
sowohl die Probenkonzentration als auch das Molekulargewicht zu jedem Elutionsvolumen
bestimmt, wodurch die wahre Molekulargewichtsverteilung sowie die
Molekulargewichtsmittelwerte ermittelt werden können.
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