Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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3.5.2 Integrinrezeptor-Expression in C2C12-Zellen
Als Testsystem zur Aufnahme polyomavirusanaloger Partikel mit RGD-Motiv sollten
Zellen verwendet werden, die die entsprechenden Integrinrezeptoren exprimieren.
Integrine sind zwar nahezu ubiquitär auf allen Zellen verbreitet, jedoch werden sie u.a.
verstärkt in glatten Muskelzellen exprimiert (Hedin et al., 1990). Als Testsystem zur
Aufnahme Polyomavirus-analoger Partikel dienten daher Kulturen der Maus-
Muskelzelllinie C2C12. Diese Zellen sind primäre Myoblasten, die in der Kultur
differenzieren und Myofibrillen ausbilden können (Yaffe & Saxel, 1977). Die Zelllinie
C2C12 exprimiert den Laminin-Rezeptor, α7β1-Integrin verstärkt, der in der Lage ist,
RGD-Liganden zu binden (Yao et al., 1997).
Hier wurde in dieser Zelllinie zusätzlich die Expression von αv-Integrinen untersucht,
da diese Rezeptoruntereinheit die Aufnahme verschiedener Viren vermittelt.
Beispielsweise wird Adenovirus über αvβ3- und αvβ5-Integrine aufgenommen (Huang et
al., 1995, Wickham et al., 1994).
1000 bp
700 bp
500 bp
M 2 4 6 8 12 15 17 19
Abbildung 51. α v-Integrin-Transkription in C2C12-Zellen. Die RT-PCR ergab nahezu konstante
Mengen der α v-mRNA über einen Zeitraum zwischen 2 und 19 d.
Über RT-PCR wurden αv-Integrin-mRNAs in unterschiedlichen Entwicklungsstufen der
Zellen nachgewiesen. Die Menge der mRNA blieb dabei über einen Zeitraum von 19 d
in etwa konstant, wie der Vergleich mit der Amplifikation eines Kontrollgens
(Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase, GAPDH) zeigte (Abbildung 51). Über
diesen Zeitraum differenzieren die C2C12-Myoblasten in der Kultur zu multinuklearen
Myofibrillen (Yaffe & Saxel, 1977, Parthier, 1998). Die Transkription des αv-
Integringens ist davon aber nicht beeinflusst.
3.5.3 Aufnahme in C2C12-Muskelzellen
GAPDH
α v-Integrin
Als Testsystem zur Aufnahme fluoreszenzmarkierter Polyomavirus-analoger Partikel
dienten Kulturen der Maus-Muskelzelllinie C2C12. Zu noch nicht differenzierten
Myoblasten wurden die fluoreszenzmarkierten Kapside VP1-CallS-T248C, VP1-
1RGD150 und VP1-1RGD292 in einer Konzentration von 0.5 bis 1.0 nM zugegeben
und für 1 h bei 37 °C und 5% CO2 inkubiert. Danach wurden die Zellen mit PBS
gewaschen und am Fluoreszenzmikroskop betrachtet.