Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
Erfolgreiche ePaper selbst erstellen
Machen Sie aus Ihren PDF Publikationen ein blätterbares Flipbook mit unserer einzigartigen Google optimierten e-Paper Software.
Abbildung 56. SDS-PAGE <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-R77W (1), das über Chitin-Affinitäts-Chromatographie<br />
gereinigt wurde.<br />
Absorption[mAU]<br />
M 1<br />
109<br />
Das Protein <strong>VP1</strong>-R77W wurde als Intein-CBD-Fusionsprotein in E. coli expr<strong>im</strong>iert und<br />
mittels Chitinaffinitäts-Chromatographie gereinigt (Abbildung 56). Die Expressionsrate<br />
war mit anderen <strong>VP1</strong>-<strong>Varianten</strong> vergleichbar und lag bei etwa 5 mg pro Liter<br />
Schüttelkultur. Eine spektroskopische Charakterisierung ergab keinerlei Hinweise auf<br />
strukturelle Abweichungen zum Wildtyp-Protein, die Thermostabilität <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-R77W<br />
war ebenfalls mit dem Wildtyp-Protein vergleichbar (Waldmann, 1998).<br />
1.0<br />
0.8<br />
0.6<br />
0.4<br />
0.2<br />
0.0<br />
60 kDa<br />
50 kDa<br />
40 kDa<br />
30 kDa<br />
280 nm<br />
260 nm<br />
Abbildung 57. Analytische Gelfiltrations-Chromatographie fluoreszenzmarkierter, isolierter<br />
<strong>VP1</strong>-R77W-Kapside. Die Elutionsvolumina für Kapside (6-8 ml) und Kapsomere (9-10 ml)<br />
sind hervorgehoben.<br />
<strong>VP1</strong><br />
trunkiertes <strong>VP1</strong><br />
0 2 4 6 8 10 12 14 16<br />
Volumen [ml]
Change language