Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
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molarer Überschuss sowohl <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-2C als auch <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-R77W konnten die<br />
Aufnahme signifikant reduzieren, so dass <strong>von</strong> einem spezifischen<br />
Aufnahmemechanismus ausgegangen werden musste.<br />
a b<br />
Abbildung 59. Aufnahme <strong>von</strong> fluoreszenzmarkierten <strong>VP1</strong>-R77W-Kapsiden in NIH 3T3-Zellen.<br />
In allen Zellen konnte nach 1 h Inkubation (a) bzw. nach 2 h (b) mit einem konfokalen Laser-<br />
Scanning-Mikroskop die Fluoreszenz der markierten Kapside beobachtet werden.<br />
Eine Quantifizierung der Fluoreszenzmikroskopie-Exper<strong>im</strong>ente wurde mittels<br />
Durchfluss-Zytometrie durchgeführt. Die Zellen wurden auf analoge Weise mit<br />
fluoreszenzmarkierten <strong>VP1</strong>-R77W-Kapsiden inkubiert und dann zur Messung mit PBS<br />
gewaschen, trypsiniert und mit Paraformaldehyd fixiert. Die Messungen bestätigten die<br />
vorherigen Beobachtungen (Abbildung 60): <strong>VP1</strong>-R77W Kapside wurden in die Zellen<br />
aufgenommen, mit einer leicht gesteigerten Effizienz gegenüber <strong>VP1</strong>-CallS-T248C-<br />
Kapsiden. Eine Kompetition der Aufnahme war auch hier sowohl mit <strong>VP1</strong>-2C als auch<br />
mit unmarkierten <strong>VP1</strong>-R77W-Kapsiden möglich.
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