Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

Absorption[mAU]
Zur Ermittlung der Stabilität in vitro-assemblierter VP1-Kapside wurden über
Gelfiltrations-Chromatographie VP1-wt, VP1-2C und VP1-CallS-Kapside isoliert und
bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proben wurden nach 2 h und nach 3 d
rechromatographiert (Abbildung 31). Nach 2 h wurden in allen Proben jeweils nur die
isolierten Kapside beobachtet. Nach 3 d jedoch waren die VP1-CallS-Kapside zur
Hälfte dissembliert, so dass Kapsid- und Kapsomer-Peaks beobachtet wurden. Die
Kapside aus VP1-wt und VP1-2C waren auch nach 3 d noch vollständig assembliert
(Abbildung 31).
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0 2 4 6 8 10
Volumen [ml]
Abbildung 31. Stabilität isolierter Kapside. Nach 2 h wurden in allen Proben nur Kapside
beobachtet, nach drei Tagen waren VP1-CallS-Kapside zur Hälfte dissembliert, wohingegen
VP1-2C und VP1-wt noch vollständig assembliert vorlagen.
Für einen therapeutischen Einsatz wäre eine längere Stabilität der Partikel in der
Blutbahn bei 37 °C nötig. Als einfaches Modellsystem wurden Kapside der drei VP1-
Varianten wt, 2C und CallS mit 5 % Rinderserum versetzt und bis zu 3 d bei 37 °C
inkubiert. Vergleichend dazu wurden die Kapside im Kapsidpuffer bei 37 °C inkubiert.
Die Analyse der Proben im Hinblick auf Kapsidstabilität und Proteinaggregation
erfolgte wiederum mit HPLC-Gelfiltrations-Chromatographie. Die Säule TSK-Gel
5000PWXL erlaubte eine Trennung von Kapsiden und Serumproteinen, so dass eine
Quantifizierung der Kapside möglich war (Abbildung 32). Bei allen VP1-Varianten
blieb der gemessene Kapsidanteil konstant, das heißt, weder in Kapsidpuffer noch in
Gegenwart von Rinderserum wurde eine Aggregation der Proteine oder ein Abbau der
Kapside beobachtet.
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