Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
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ionische Wechselwirkung aufgehoben, ein Modell <strong>des</strong> Proteins <strong>VP1</strong>-R77W ergab<br />
außerdem, dass der Indolring <strong>des</strong> Tryptophans in die Bindungstasche hineinragen würde<br />
und somit eine sterische Blockierung der Bindungstasche verursachen würde<br />
(Abbildung 55).<br />
Abbildung 55. Struktur der Bindungstasche für Sialyllactose (rot) auf der Oberfläche <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>.<br />
Ein Austausch <strong>von</strong> Arginin 77 (blau) gegen Tryptophan (grün) zerstört die ionische<br />
Wechselwirkung <strong>des</strong> Arginins mit der Carboxylgruppe der Sialylsäure und führt gleichzeitig zu<br />
einer sterischen Blockierung der Bindungstasche.<br />
3.6.1 Herstellung und Charakterisierung <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-R77W<br />
Die Mutation der <strong>VP1</strong>-Sequenz <strong>von</strong> Arginin 77 nach Tryptophan 77 wurde mit den<br />
Oligonukleotiden <strong>VP1</strong>-R77Wf und <strong>VP1</strong>-R77Wr eingeführt. Als Templat diente das<br />
Plasmid pET21-<strong>VP1</strong>-3C-Int, da eine Fluoreszenzmarkierung der Kapside geplant war.<br />
Die erfolgreiche Mutagenese wurde durch DNA-Sequenzierung verifiziert.
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