Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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Bei VP1-3C-WW150 trat keinerlei Aggregation auf, und eine Analyse mit HPLC-
Gelfiltrations-Chromatographie ergab eine vollständige Assemblierung zu
virusanalogen Partikeln (Abbildung 69). In diesem Fall war die Disulfidbrücke
zwischen den Cysteinen 19 und 114‘ nicht nur für eine vollständige Assemblierung
wichtig, sondern sie verhinderte gleichzeitig eine Aggregation der offenen Kapside.
Diese nichtoxidierten Kapside schienen bei VP1-WW150 eine starke Tendenz zur
Aggregation bei höheren Konzentrationen zu besitzen, so dass das Protein so lange
aggregierte und aus dem Gleichgewicht verschwand, bis diese kritische Konzentration
unterschritten wurde.
3.7.4 Bindung von VP1-WW150 und VP1-WW292 an prolinreiche Liganden
Die Charakterisierung der Bindungseigenschaften von VP1-WW150 und VP1-WW292
erfolgte über Oberflächenplasmonresonanzmessungen. Zur Messung wurde auf einen
CM5-Chip ein prolinreiches Peptid mit folgender Sequenz gekoppelt:
a
Signal [RU]
800
600
400
200
0
b
600
Signal [RU]
400
200
+ H3N-Cys-Ser-Gly-(Pro)8-Pro-Pro-Leu-Pro-COO - (PPLP-Peptid)
-50 0 50 100 150 200
Zeit [s]
250 300 350 400 450
0
-50 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
Zeit [s]
Abbildung 70. Oberflächenplasmonresonanzmessungen der Bindung von VP1-WW150-
Kapsomeren an immobilisiertes PPLP-Peptid. Dargestellt sind die Messungen in Pentamer-
Puffer (a) und PBS (b). Die Proteinkonzentrationen bei der Messung lagen bei 20 nM (blau),
15 nM (rot), 10 nM (grün) und 5 nM (grau).