Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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komplementärer Oligonukleotide zusammengesetzt wurde. Die Oligonukleotide Linker-
5‘c und Linker-3‘s wurden an ihren 5‘-Enden phosphoryliert, so dass die Linkerhälften
für eine Ligation eingesetzt werden konnten. Die beiden phosphorylierten
Oligonukleotide wurden dann jeweils mit ihrem komplementären Oligonukleotid
(Linker-5‘s und Linker-3‘c) hybridisiert. Die hybridisierten Fragmente wurden dann an
ihren phosphorylierten sticky ends ligiert. Das Ligationsprodukt wurde über ein
präparatives Polyacrylamidgel gereinigt und anschließend in den Vektor pET21-Int
kloniert. Die Sequenz der Prolin-Tags und der Klonierungsstelle wurde durch DNA-
Sequenzierung verifiziert.
3.7.6 VP1 mit N-terminaler Fusion einer WW-Domäne
Für eine Ligandenbindung auf der Kapsidinnenseite wurden Varianten des
Polyomavirus-Hüllproteins VP1 geplant, die eine Fusion der WW-Domäne am N-
Terminus enthielten. Der VP1-N-Terminus ragt nach der Assemblierung in das Kapsid
hinein, so dass an die WW-Domäne gebundene Liganden in das Kapsidinnere dirigiert
werden. Ein Modell des Proteins VP1-WW14 ist in Abbildung 72 dargestellt.
Abbildung 72. Modell der Struktur von VP1-WW14. Die ersten 14 Aminosäuren der VP1-
Sequenz wurden durch die WW-Domäne ersetzt, die in blau dargestellt ist.