Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
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116<br />
a<br />
b<br />
Abbildung 63. Modell der Struktur <strong>von</strong> <strong>VP1</strong>-WW150. (a) <strong>VP1</strong>-WW150-Monomer, die WW-<br />
Domäne ist in grün dargestellt, die Linkersequenzen in rot. (b) <strong>VP1</strong>-WW150-Pentamer <strong>von</strong> der<br />
Kapsidaußenseite betrachtet, die WW-Domäne ist in violett dargestellt mit blau gezeichneten<br />
Linkern.<br />
Die Klonierung für eine Insertion der WW-Domäne erfolgte unabhängig <strong>von</strong> in der<br />
Sequenz vorhandenen Restriktionsschnittstellen über mehrere PCR-Schritte<br />
(Abbildung 64). Dabei wurde die Eigenschaft <strong>von</strong> TypIIS-Restriktionsendonukleasen<br />
ausgenutzt, in einem definierten Abstand außerhalb der Erkennungssequenz zu<br />
schneiden. Die 5‘-Hälfte der <strong>VP1</strong>-Sequenz wurde mit den Oligonukleotiden <strong>VP1</strong>-NdeI-<br />
5‘ und <strong>VP1</strong>-WW150-N bzw. <strong>VP1</strong>-WW292-N amplifiziert, die 3‘-Hälfte mit den
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