Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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von Sialyllactose-bindenden Viruspartikel untersucht. In der Kultur des Wildtyp-Virus
wurde wiederum eine starke Hämagglutination beobachtet, die bei dem R77W-Virus
nicht auftrat (Abbildung 61). Nach sieben Tagen wurde der Virustiter in den Kulturen
mit einem Plaque-Assay bestimmt. Für das Wildtyp-Virus ergab sich ein für
Polyomavirus üblicher Titer von ca. 1×10 8 pfu/ml, bei Polyomavirus pY-R77W wurden
keine Plaques beobachtet.
a b
c
1
2
50 µm
Kapsidkonzentration
50 µm
Abbildung 61. Herstellung des Polyomavirus pY-R77W. Fünf Tage nach der Transfektion von
NIH 3T3-Zellen wurden mit dem Vektor pY-R77W keinerlei zytopathischen Effekte beobachtet
(a), wohingegen mit dem Wildtyp-Vektor pY ein massives Absterben der Zellen beobachtet
wurde (b). (c) Im Überstand konnte nur eine Hämagglutination des Wildtyp-Polyomavirus (2)
nachgewiesen werden, bei pY-R77W waren keine hämagglutinierenden Partikel ins Medium
sekretiert worden (1).
Diese Experimente bestätigen die Notwendigkeit der Bindung an Sialyloligosaccharide
für einen erfolgreichen Replikationszyklus von murinem Polyomavirus. Die Mutation
R77W ist zur Hemmung der Replikation ebenso geeignet, wie die bereits beschriebenen
R77E und R77Q-Mutationen (Bauer et al., 1999). Obwohl die Aufnahme der
Viruspartikel, zumindest in der Zellkultur, nicht von der Bindung des Kohlenhydrats
abhängt, ist eine Bindung an Sialyloligosaccharide trotzdem für die Replikation des
Virus essentiell und muss sich daher auf ein späteres Ereignis in dem
Replikationszyklus des Virus auswirken.