Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im
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a<br />
Sph I<br />
Bam HI<br />
b<br />
Bam HI<br />
amp<br />
amp<br />
Bam HI<br />
colE1<br />
Bam HI<br />
<strong>VP1</strong> , VP2, VP3<br />
colE1<br />
<strong>VP1</strong> , VP2, VP3<br />
pX3f-pY<br />
(8.3 kb)<br />
135<br />
Abbildung 78. Plasmide pX3f-pY (a) und pX4f-pY-GFP (b). In dem Vektor pX4f-pY-GFP<br />
wurde der größte Teil der T-Antigene durch die Sequenz <strong>des</strong> Reportergens GFP ersetzt, so dass<br />
eine autonome Replikation <strong>des</strong> Plasmids pY-GFP verhindert wurde.<br />
Das modifizierte <strong>Polyomavirus</strong>genom konnte aus dem Plasmid pX4f-pY-GFP durch<br />
einen präparativen Restriktionsverdau mit Bam HI gewonnen werden. Das pY-GFP-<br />
Fragment wurde isoliert und religiert und stand dann für eine Transfektion in<br />
Zellkulturen zur Verfügung.<br />
3.8.2 Verpackungszelllinien für murines <strong>Polyomavirus</strong><br />
spätes pr<strong>im</strong>äres Transkript<br />
spätes pr<strong>im</strong>äres Transkript<br />
pA<br />
Die Verpackungszelllinien zur Produktion replikationsdefizienter Polyomaviren sollten<br />
die T-Antigene <strong>des</strong> Virus stabil expr<strong>im</strong>ieren, um so die Replikation und Assemblierung<br />
ori<br />
ori<br />
pX4f-pY-GFP<br />
(8.3 kb)<br />
pA<br />
frühes pr<strong>im</strong>äres Tr anskript<br />
Nsi I<br />
GFP<br />
frühes Transkript<br />
T-Antig<br />
e ne<br />
Sph I<br />
Sph I<br />
SV40 p A<br />
Sph I<br />
Sph I<br />
Nsi I<br />
Sph I
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