Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

3.2.2 Reinigung von VP1-CallS und VP1-2C
Alle neuen VP1-Varianten, VP1-CallS, VP1-2C und VP1-ΔC61 wurden als Intein-
CBD-Fusionsproteine in E. coli exprimiert und nach dem optimierten Schema gereinigt.
Die Ausbeuten an gereinigtem Protein aus 1 l Kulturmedium waren für VP1-2C und
VP1-ΔC61 mit dem Wildtyp-Protein vergleichbar. Mit VP1-CallS lag die Ausbeute
etwas höher, bei 6 mg pro Liter. Eine SDS-PAGE der über Chitin-Affinitäts-
Chromatographie gereinigten Proteine ist in Abbildung 26 dargestellt. Bei VP1-ΔC61
wurden noch einige höhermolekulare Verunreinigungen beobachtet, dafür wurden bei
diesem Protein nicht die typischen Banden eines proteolytischen Abbaus beobachtet.
60 kDa
50 kDa
40 kDa
30 kDa
20 kDa
M 1 2 3
Abbildung 26. Über Chitinaffinitäts-Chromatographie gereinigte Varianten von VP1. Bahnen:
Marker (M), VP1-CallS (1), VP1-ΔC61 (2), VP1-2C (3).
3.2.3 CD-Spektroskopie von VP1-CallS und VP1-2C
VP1-CallS/VP1-2C
VP1-ΔC61 Eine korrekte Faltung der modifizierten VP1-Proteine wurde durch einen Vergleich der
CD-Spektren mit denen des Wildtyp-Proteins nachgewiesen. Untersucht wurde eine
Probe VP1-CallS unter nicht-Assemblierungsbedingungen und VP1-2C unter
Assemblierungsbedingungen (Abbildung 27). Die Spektren deuteten auf korrekt
gefaltete Proteine hin und zeigten keine signifikanten Abweichungen zum Wildtyp-
Protein (Abbildung 21). Das zeigte sich auch bei der Dekonvolution der Spektren, die
eine sehr gute Übereinstimmung zwischen den einzelnen Proteinen ergab
(Abbildung 27).
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