Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

Endosomen (f, rot/grün) als auch mit Lysosomen (g, blau/rot) colokalisiert. Nach Inkubation für
2 h befanden sich die virusanalogen Partikel nahezu ausschließlich in Lysosomen (h,i, blau/rot).
Bei einer gleichzeitigen Anfärbung der Endosomen und Lysosomen zeigte sich, dass die
VP1-Kapside zunächst in Endosomen aufgenommen wurden, die dann im weiteren
Verlauf mit Lysosomen fusionierten. Nach einer Inkubation für 120 min wurde eine
starke Anreicherung der Kapside in Lysosomen beobachtet (Abbildung 45).
3.4.2 Aufnahme in NIH 3T3-Zellen
Analog zu den Experimenten mit C2C12-Zellen wurden NIH 3T3-Maus-Fibroblasten
verwendet, die ein gutes in vitro-Replikationssystem für Maus-Polyomavirus darstellen
(Bauer et al., 1995). Auf diese Weise sollte ausgeschlossen werden, dass die lysosomale
Anreicherung der Partikel, der in C2C12-Zellen beobachtet wurde, vom Zelltyp
abhängig war. Falls eine Abhängigkeit des Aufnahmewegs vom Zelltyp bestand, sollte
in den permissiven NIH 3T3-Zellen auf jeden Fall eine endosomale Freisetzung
stattfinden.
NIH 3T3-Zellen wurden für 1 h mit 0.5 bis 1.0 nM fluoreszenzmarkierten Kapsiden
inkubiert, die entweder aus VP1-CallS-T248C oder VP1-3C-Kapsomeren aufgebaut
waren. Gleichzeitig wurden die zellulären Lysosomen angefärbt. Die subzelluläre
Lokalisation der Kapside erfolgte dann wiederum mit einem konfokalen Laser-
Scanning-Mikroskop (Abbildung 46). Auch mit NIH 3T3-Zellen wurde eine
Anreicherung der VP1-Kapside in Lysosomen beobachtet, eine endosomale Freisetzung
fand auch in diesem Zelltyp nicht statt.
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