Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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detektieren zu können. In den Gesamtzellproben konnte praktisch kein Fusionsprotein
nachgewiesen werden, jedoch wurde sowohl einzelnes VP1 als auch Intein-CBD
beobachtet, so dass das Fusionsprotein zwar exprimiert, aber bereits in der Zelle
vollständig gespalten wurde, was eine Reinigung von VP1 über die
Chitinbindungsdomäne verhinderte (Abbildung 15).
60.0 kDa
50.0 kDa
40.0 kDa
Abbildung 15. Western Blot mit Anti-Intein- und Anti-VP1-Antikörpern. Aufgetragen sind
jeweils gesamte Zellen aus BL21(DE3)/pET21-VP1Int (1), XL-1 blue/pCYB-VP1 (2) und
DH5α/pCYB-VP1 (3).
Zur Verlangsamung der in vivo-Spaltung des Fusionsproteins wurden Expressionstests
durchgeführt, die nach der Induktion bei 15 °C für 15 h geschüttelt wurden. Die Zellen
wurden geerntet und durch Hochdruckdispersion aufgeschlossen. Eine Reinigung des
VP1 wurde getestet, indem der Rohextrakt zur Bindung des Fusionsproteins auf eine
Chitinbeads-Säule aufgetragen wurde.
135.0 kDa
81.0 kDa
41.9 kDa
31.4 kDa
Anti-Intein Anti-VP1
1 2 3 1 2 3
Anti-Intein Anti-VP1
M 1 2 M 1 2
VP1-Intein-CBD
Intein-CBD
VP1
Intein-CBD
VP1
Abbildung 16. Western-Blot mit Anti-Intein- und Anti-VP1-Antikörpern von
denaturiert eluierten Fraktionen (1) und nativ eluierten Fraktionen (2) bei der Chitin-
Affinitäts-Chromatographie.