Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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a
Absorption[mAU]
b
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
VP1
freier Farbstoff
VP1
trunkiertes VP1
280 nm
492 nm
- 5 15 60 90
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Volumen [ml]
Abbildung 34. Freie SH-Gruppen im assemblierten VP1-2C-Kapsid. (a) Verlauf der
Markierungsreaktion über 90 min, auf allen Bahnen wurde dieselbe Proteinmenge aufgetragen.
(b) HPLC-Gelfiltration mit maximal markierten VP1-2C-Kapsiden.
3.3 Ortsspezifische Fluoreszenzmarkierung polyomavirusanaloger Partikel
Für eine Analyse der Aufnahme polyomavirusanaloger Partikel und ihres intrazellulären
Targeting wurde versucht, die Partikel mit einem Fluoreszenzfarbstoff zu markieren.
Fluoreszenzmarkierungen haben den Vorteil, dass die Experimente mit lebenden Zellen
durchgeführt werden können. Außerdem sind Fluoreszenztechniken sehr sicher und
relativ kostengünstig im Vergleich zu radioaktiven Markierungen und
Elektronenmikroskopie (Bartlett & Samulski, 1998). Im Gegensatz zu bislang
angewendeten Methoden zur relativ unspezifischen Markierung von Virusoberflächen
an Aminogruppen (Leopold et al., 1998), sollte hier versucht werden, eine
ortsspezifische Fluoreszenzmarkierung an definierten Cysteinresten einzuführen.
Dadurch konnte ausgeschlossen werden, dass die relativ großen, hydrophoben
Fluoreszenz Coomassie