Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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Abbildung 62. Modell der WWa-Domäne aus dem forminbindenden Protein der Maus,
zusammen im Komplex mit einem prolinreichen Peptid (blau), basierend auf der Struktur der
Yap-WW-Domäne (Macias et al., 1996, Christoph Parthier, Dissertation in Vorbereitung). Die
konservierten Tryptophan-Reste sind in grün dargestellt.
Für eine Bindung von Proteinen mit prolinreichen Sequenzen an VP1-WW-
Fusionsproteine wurden zwei Strategien verfolgt. Zum einen wurden Varianten von
VP1 geplant, die die WW-Domäne auf ihrer Außenseite präsentieren und somit eine
Bindung von Zelltargeting-Modulen ermöglichen sollten. Zum anderen wurden VP1-
WW-Fusionsproteine geplant, die die WW-Domäne auf der Kapsidinnenseite besitzen,
um einen gerichteten Einschluss von Peptiden und Proteinen mit prolinreicher Sequenz
in die Kapside zu vermitteln. Für alle Varianten wurde die WWa-Domäne aus dem
forminbindenden Protein 11 der Maus verwendet.
3.7.1 Herstellung der Proteine VP1-WW150 und VP1-WW292
Für eine Präsentation der WW-Domäne auf der Außenseite Polyomavirus-analoger
Partikel wurden die Proteine VP1-WW150 und VP1-WW292 geplant. An den
Positionen 150 und 292 innerhalb der VP1-Sequenz wurde die Sequenz der WW-
Domäne inseriert. Die WW-Domäne wurde von einem flexiblen Linker aus je fünf
Aminosäuren, bestehend aus Serin-Glycin-Wiederholungen, flankiert, um eine
unabhängige Faltung der WW-Domäne zu ermöglichen. Ein Modell der Struktur von
VP1-WW150 ist in Abbildung 63 gezeigt. Die beiden Positionen für die Insertion
befinden sich in β-Turns auf der Kaspdidaußenseite und wurden bereits für die Insertion
eines RGD-Motivs verwendet. Dabei hatte sich gezeigt, dass VP1 an beiden Stellen
Insertionen akzeptiert, ohne dass die Proteinfaltung und Kapsidassemblierung gestört
wird.