Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

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Die Beobachtungen, die am Fluoreszenzmikroskop gemacht wurden, konnten durch die
Fluoreszenzmessungen am Durchfluss-Zytometer bestätigt werden. Die VP1-
1RGD150-Kapside zeigten eine deutlich höhere Aufnahme in die Muskelzellen.
Kapside aus VP1-CallS-T248C und VP1-1RGD292 wurden in vergleichbaren aber
geringeren Mengen aufgenommen, so dass das RGD-Motiv in VP1-1RGD292 keinen
positiven Effekt auf die Aufnahme hatte (Abbildung 53).
Relative Fluoreszenzintensität
1.7
1.6
1.5
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0
VP1-CallS-T248C
VP1-1RGD150
VP1-1RGD292
Abbildung 53. Aufnahme von virusanalogen Partikeln in C2C12-Muskelzelle. Die
Fluoreszenzintensitäten wurden mit Durchfluss-Zytometrie gemessen und auf nichtinkubierte
Kontrollproben bezogen (Intensität „1“ entspricht der Kontrolle). Mit jeder Variante wurden
mindestens vier Proben vermessen.
Für einen Nachweis der Spezifität der gemessenen Fluoreszenzintensitäten wurden
Kompetitionsexperimente mit unmarkierten Kapsiden durchgeführt. Dabei erfolgte die
Inkubation mit den markierten Kapsiden in Gegenwart eines 20-fachen molaren
Überschusses mit unmarkierten Kapsiden. Die Aufnahme von VP1-CallS-T248C und
VP1-1RGD292 konnte mit unmarkiertem VP1-CallS-T248C deutlich inhibiert werden
(Abbildung 54). Das bestätigte wiederum, dass bei VP1-1RGD292 das RGD-Motiv
unwirksam war. Auch die Aufnahme von VP1-1RGD150 konnte zum Teil mit VP1-
CallS-T248C inhibiert werden, so dass diese Kapside ebenfalls teilweise über den
natürlichen VP1-Rezeptor in die Zelle gelangen mussten. Ein größerer
Kompetitionseffekt zeigte sich allerdings mit unmarkiertem VP1-1RGD150. Das
deutete darauf hin, dass die VP1-1RGD150-Kapside zusätzlich über Integrinrezeptoren
mit Hilfe des RGD-Motivs aufgenommen wurden.