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Untersuchungen von Varianten des Po
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4 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung .
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6 3.4.2 Aufnahme in NIH 3T3-Zellen.
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8 1 Einleitung 1.1 Molekulare Thera
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10 dass der Bedarf an Protein Deliv
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12 unterschieden. Derzeit stellen v
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14 Die Kondensation bzw. Komplexier
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16 immungeschwächten Menschen (Tra
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18 a c b Abbildung 3. Kristallstruk
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20 VP1 , VP2, VP3 spätes primäres
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22 die Assemblierung der Virusparti
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24 2. In vitro-Assemblierung mit al
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26 2 Methoden und Materialien 2.1 M
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28 2.1.5 Polyacrylamid-Gelelektroph
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30 2.1.7 Dephosphorylierung von DNA
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32 Vorgang Temperatur Dauer Zyklen
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34 Puffer und Lösungen 10× Pfu-DN
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36 Für die Chitin-Affinitäts-Chro
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38 Nach dem Gießen der Trenngele w
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40 PAA 30 4× Nativ-Sammelgelpuffer
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42 2.2.9 Fluoreszenzmarkierung Zur
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44 M r Θ ⋅100 ⋅ N A [ Θ] = c
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46 Abbildung 8. Prinzip der Biacore
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48 Die Zellsuspension wurde dann so
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50 Geräte Thermocycler: Mastercycl
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52 Geräte 4-/6-/24-Well-Platten (N
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54 Spiegel und einem Emissionsfilte
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56 Probenvorbereitung Zur Messung a
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58 Färbung von Endosomen Dextrane
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60 1vpn), und für die in dieser St
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62 VP1-T248Cr VP1-C248Tf VP1-T248Cr
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64 3 Ergebnisse 3.1 Expression in E
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66 detektieren zu können. In den G
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68 Da DTT in alkalischer Lösung ra
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70 a b VP1-Kapsomer 10 negative Ste
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72 a b c Δε Δε 2 1 0 -1 -2 -3 -
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74 3.2 Untersuchung des Assemblieru
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76 VP1-wt VP1-CallS VP1-2C C11 C15C
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78 a b c ΔεΔε 2 1 0 -1 -2 -3 -4
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80 erfolgte mit Standardproteinen.
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82 3.2.6 Dissemblierung und Stabili
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84 Absorption[mAU] 12 10 8 6 4 2 0
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86 a Absorption[mAU] b 1.0 0.8 0.6
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88 dem Protein verborgen, so dass e
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90 a b RelativeFluoreszenzmarkierun
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92 Von den isolierten Kapsiden wurd
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94 Die fluoreszenzmarkierten Kapsid
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96 a b c d e h i 10 µm 10 µm 10
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98 a b 10 µm 10 µm 10 µm d e 10
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100 VP1-CallS-T248C-Kapsomere wurde
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102 RGD-Motiv Abbildung 48. Modell
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104 3.5.2 Integrinrezeptor-Expressi
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106 Die Beobachtungen, die am Fluor
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108 ionische Wechselwirkung aufgeho
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110 Die in vitro-Assemblierung wurd
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112 RelativeFluoreszenzintensität
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114 3.7 VP1-Fusionsproteine mit ein
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116 a b Abbildung 63. Modell der St
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118 entsprechenden Fragmente wurden
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120 Weiterhin wurde die Thermostabi
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122 Gleichgewicht zwischen Kapsomer
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124 Die Funktionalität des Sensorc
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126 komplementärer Oligonukleotide
- Seite 128 und 129:
128 Absorption[mAU] a b 1.4 280 nm
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130 effizientes Delivery-System fü
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Signal[RU] 132 60 50 40 30 20 10 0
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134 3.8 Replikationsdefiziente Poly
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136 der Viruspartikel in diesen Zel
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138 wurden auf eine induzierbare GF
- Seite 140 und 141: 140 Polyomavirus T-Antigens in diff
- Seite 142 und 143: 142 al., 1996). Im Genom des Maus-P
- Seite 144 und 145: 144 a Verhältnis: DsRed/GFP DsRed-
- Seite 146 und 147: Kapsidanteil[%] 146 a 100 100 b 80
- Seite 148 und 149: 148 4 Diskussion 4.1 Expression in
- Seite 150 und 151: 150 Proteasen. Allerdings wurde fü
- Seite 152 und 153: 152 Bedingungen nur bei 55 %, so da
- Seite 154 und 155: 154 4.3 Fluoreszenzmarkierte polyom
- Seite 156 und 157: 156 nachgewiesen wurden. Der hier g
- Seite 158 und 159: 158 4.5 Insertion eines RGD-Motivs
- Seite 160 und 161: 160 10 -3 bis 10 -4 M bestimmt (Ste
- Seite 162 und 163: 162 4.7 VP1-Fusionsproteine mit ein
- Seite 164 und 165: 164 forminbindenden Protein 11 der
- Seite 166 und 167: 166 Plasmid GFP unter Kontrolle des
- Seite 168 und 169: 168 5 Zusammenfassung und Ausblick
- Seite 170 und 171: 170 Bindung allein nicht ausreicht,
- Seite 172 und 173: 172 6 Literatur Ahrens, E.R., Gossa
- Seite 174 und 175: 174 Bowen, J.H., Chlumecky, D., D
- Seite 176 und 177: 176 Clark, B. & Desselberger, U. My
- Seite 178 und 179: 178 Fried, H., Cahan, L.D. & Paulso
- Seite 180 und 181: 180 Huang, S., Endo, R.I. & Nemerow
- Seite 182 und 183: 182 Marin, M., Noel, D., Valsesia-W
- Seite 184 und 185: 184 Park, E., Starzyk, R.M., McGrat
- Seite 186 und 187: 186 Sahli, R., Freund, R., Dubensky
- Seite 188 und 189: 188 Taichman, L.B., Breitburd, F.,
- Seite 192 und 193: 192 7.2 Erklärung englischer Fachb
- Seite 194 und 195: 194 8 Danksagung Die vorliegende Ar
- Seite 196: 196 Erklärung Hiermit erkläre ich
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