Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

a b
c
105
Abbildung 52. Aufnahme von virusanalogen Partikeln in C2C12-Muskelzellen. Im
Fluoreszenzmikroskop konnten Intensitätsunterschiede mit den fluoreszenzmarkierten Kapsiden
aus VP1-CallS-T248C (a), VP1-1RGD292 (b) und VP1-1RGD150 (c) beobachtet werden.
Im Fluoreszenzmikroskop konnte qualitativ die Aufnahme der Kapside in die Zellen
nachgewiesen werden (Abbildung 52). Dabei fiel auf, dass zwischen der
Fluoreszenzintensität von VP1-CallS-T248C und VP1-1RGD292 praktisch kein
Unterschied beobachtet wurde. Mit VP1-1RGD150 Kapsiden zeigte sich jedoch eine
verstärkte Aufnahme der Kapside in die Zellen.
Für eine genauere Quantifizierung der Aufnahme wurden die Zellen analog mit
fluoreszenzmarkierten Kapsiden inkubiert. Anschließend wurden die Zellen mit PBS
gewaschen, trypsiniert und mit Paraformaldehydlösung fixiert. Die
Fluoreszenzintensität in den Muskelzellen wurde mit Hilfe von Durchfluss-Zytometrie
gemessen. Die Intensitätsunterschiede waren in allen Proben aufgrund der geringen
Fluoreszenzintensität relativ gering und lagen im Bereich von einer 10-80 %igen
Zunahme gegenüber Kontrollproben ohne markiertem VP1. Zum Vergleich der
einzelnen Experimente wurden relative Intensitäten, bezogen auf die Kontrollproben,
berechnet.