Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

a
Ereignisse
b
Ereignisse
Kapside
Texas Red-Fluoreszenz
Fluorescein-Fluoreszenz Fluorescein-Fluoreszenz
Kapside
c
gemischte
Kapside
147
Texas Red-Fluoreszenz
Abbildung 86. Durchfluss-Zytometrie-Analyse von Kapsiden, die aus unterschiedlich
markierten VP1-CallS-T248C-Kapsomeren aufgebaut wurden. Eine reine in vitro-
Assemblierung von Fluorescein- (a) und Texas Red-markiertem (b) VP1-CallS-T248C ergab
zwei Populationen von virusanalogen Partikeln und freiem pentameren Protein. Bei einer
Coassemblierung wurde neben freien Kapsomeren nur eine Population gemischter Partikel
detektiert (c).
Ein weiterer Nachweis erfolgte mit der in Exkurs 1 beschriebenen Methode zur Analyse
von Protein-Aggregaten mit Hilfe von Durchfluss-Zytometrie. Da bei dieser Technik
einzelne Partikel analysiert werden, können gemischt assemblierte Kapside direkt
nachgewiesen werden. VP1-CallS-T248C wurde entweder mit Fluorescein oder mit
Texas Red markiert und einzeln bzw. in einer äquimolaren Mischung assembliert. Die
resultierenden Kapside wurden am Durchfluss-Zytometer analysiert (Abbildung 86). Es
konnten Populationen von Partikeln detektiert werden, die entweder nur die eine oder
die andere Markierung trugen, oder bei einer gemischten Assemblierung konnten
Partikel mit beiden Markierungen nachgewiesen werden. Da es sich hier streng
genommen um die gleichen Kapsomere handelte, die nur unterschiedlich markiert
wurden, waren diese in beliebigen Verhältnissen miteinander mischbar.
Diese Experimente stellen den ersten direkten Nachweis dafür dar, dass ein modularer
Aufbau virusanaloger Partikel aus verschiedenen, modifizierten Kapsomeren prinzipiell
möglich ist. Diese Beobachtungen schaffen somit die Grundlage für ein flexibles und
breit anwendbares Therapiesystem basierend auf virusanalogen Partikeln (Böhm et al.,
1999).