Untersuchungen von Varianten des Polyomavirus-Hüllproteins VP1 im

VP1
trunkiertes VP1
VP1
trunkiertes VP1
0 5 15 30 90
Abbildung 42. Fluoreszenzmarkierung von VP1-3C-Kapsiden. Die Markierungsreaktion
erfolgte bis zu 90 min mit einem 10-fachen molaren Überschuss des Farbstoffes. Die Proben
wurden auf ein SDS-Polyacrylamidgel aufgetragen, das zunächst im UV-Licht fotografiert und
anschließend mit Coomassie gefärbt wurde.
VP1-3C-Pentamere wurden unter Standardbedingungen assembliert. Die
Assemblierungseffizienz lag wie für das Wildtyp-Protein und VP1-2C bei 100 %.
Anschließend erfolgte die Markierungsreaktion mit einem 10-fachen molaren
Überschuss des Farbstoffes bis zu 1 h. Ein Vergleich mit VP1-2C zeigte im SDS-
Polyacrylamidgel eine deutlich höhere Markierungsrate (Abbildung 42).
Absorption [mAU]
ungebundener Farbstoff
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
280 nm
492 nm
Abbildung 43. Gelfiltrations-Chromatographie (TSK-Gel 5000PWXL) mit Fluoresceinmarkierten
VP1-3C-Kapsiden. Elutionsbereiche für Kapside (6-8 ml) und Kapsomere (9-10 ml)
sind markiert.
Fluoreszenz Coomassie
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Volumen [ml]
93