Ladda ned som PDF - SAU

LIPIDANALYS
Lipidanalysen koncentrerades till delområde 3. I delområdet finns flera intressanta
konstruktioner, förhoppningen är att lipidanalysen kan bidra till förståelsen av dessas
funktion. En hypotes angående konstruktionernas funktion var att de var kopplade till
djurhållning. För att testa hypotesen analyserades prover innanför och utanför hägnaden
respektive innanför och utanför pallissaden samt referensprover. Proverna analyserades med
gaskromatografi/masspektrometeri (GC/MS), för att se om det fanns någon skillnad i
sammansättningen av det organiska materialet och om det förekom någon biomarkör
kännetecknande för avföring i proverna. Valet av biomarkör baseras på tidigare forskning för
att identifiera spår av avföring och gödsling (Bethell et al., 1994; Evershed et al,. 1997).
Specifika nedbrytningsprodukter av de tre sterolerna, kolesterol, kampsterol och stigmasterol
har visat sig genereras när dessa steroler passerar ett tarmsystem. Dessa produkter är 5?kolestanol
(koprostanol), 5?-stigmastanol och 5?-kampestanol. Koprostanol har identifierats
som den rikligast förekommande 5?-stanol i avföring hos allätande däggdjur (Eneroth et al.
1964). Den vanligaste stanolen i avföring av växtätande däggdjur är 5?-stigmastanol som är
en produkt av växternas huvudsakliga sterol sitosterol och har använts som biomarkör för
gödsling (Evershed et al., 1997). Experiment har visat att biomarkörer för gödsling kan
bevaras länge (Bull et al., 1998). I proverna från Kyrsta söktes 5?-kolestanol (koprostanol),
5?-stigmastanol och 5?-kampestanol för att studera om de kunde identifieras i proverna.
En annan möjlighet att spåra olika aktiviteter är att hitta skillnader i växtlighet. Växtligheten
bör ha skiljt sig innanför respektive utanför palissaden och hägnaden beroende på olika
aktiviteter. För att undersöka skillnader i växtlighet studeras provernas totala
kolkedjesammansättning och framförallt de långa kolkedjorna. Växter innehåller främst
långkedjiga kolkedjor. Provernas totala kolkedjesammansättning av fettsyror, n-alkaner och
alkanoler beräknas i tre index, ACL (Carbon Preference Index), CDI (Carbon Diversity
Index) och CPI (Carbon Preference Index). ACL beräknar medellängden på kolkedjorna.
Generellt kan man säga att ett lågt ACL indikerar depåfetter och ett högt indikerar växtvaxer.
Med CDI beräknas hur den inbördes fördelningen ser ut i respektive prov. Ju lägre värde
desto mer domineras provet av enstaka kolkedjelängder medan ett högt värde innebär att
provet har en större diversitet i kolkedjesammansättningen. CPI beräknar om antalet kol i
kolkedjan är jämnt eller ojämnt. Fettsyror från depåfetter tenderar i högre grad än fettsyror
från växtvaxer att ha ett jämnt antal kolatomer i kolkedjan. Indexet kan även visa om det är
mikroorganismer som ligger bakom ett lågt ACL för fettsyror. För n-alkaner och alkanoler
visar CPI värdet hur pass nedbrutet provet är. Värdet närmar sig ett ju mer nedbrutet ett prov
är. Kolkedjesammansättningen påverkas av organiskt material som avsatts i marken och kan
på så sätt avslöja om olika material avsatts på olika platser och vilken typ av material som
avsatts. Eftersom långa kolkedjor främst beror på växtlighet är de värda att studera för sig.
Metod
Proverna behandlades på samma sätt som elementproverna fram till extraktionsmomentet.
Alla kärl syratvättades med HNO 3 innan användning. 5 gram av jordproverna överfördes till
extraktionskärl och 25 ml kloroform/metanol (2:1) tillsattes. Som internstandard (IS) tillsattes
10 µg n-hexatriakontan (C36). Lipiderna extraherades genom att stå i ultraljudsbad 2 x 15
minuter följt av sedimentering, därefter centrifugerades 7 ml av lösningen. 3 ml av extrakten
överfördes till preparatrör och indunstades med kvävgas. Extraktionsprodukten vägdes och
späddes med kloroform till en koncentration av 10 µg/µl. 60 µl extrakt överfördes till ett nytt
preparatrör och indunstades med kvävgas. Derivatetiseringen av proverna gjordes med 60 µl
1% TMS (klortrimetylsilan) i BSTFA (N, O-bis(trimetylsilyl)triflouracetamid) under 15
470 KYRSTA – BOPLATS