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2.5 DIAGNOSTICA IMMUNOLOGICADai dati della letteratura si evince che il 10-15% delle coppie in età fertile con problemi di concepimentoha una “infertilità immunologica”. Di questa percentuale circa l'8-10% coinvolge direttamenteil partner maschile. Le patologie andrologiche che più frequentemente possono far sospettareun'autoimmunizzazione anti-spermatozoo sono rappresentate da traumi testicolari, torsioni delfunicolo spermatico, tumori testicolari, ostruzioni parziali e/o totali dei deferenti, orchiepididimiti, flogosigenitali, che agiscono come fattore scatenante se associate ad una predisposizione genetica.Data l'assenza di sintomatologia specifica, la valutazione dell'infertilità immunologica è basata sulladiagnostica di laboratorio. Le tecniche impiegate attualmente consentono di dare una valutazionequalitativa e quantitativa della immunoreazione, di definire la classe immunoglobulinica e di individuareil sito della reazione antigene-anticorpo. Gli autoanticorpi antispermatozoo (ASA) possonoessere rilevati nel siero di sangue e nel plasma seminale con i test “indiretti”; inoltre, possono esserepresenti sulla superficie degli spermatozoi ed essere rilevati con i cosiddetti test “diretti” 1 .Le tecniche base di tutti gli studi in Immunologia della Riproduzione sono il Gelatin AgglutinationTest (GAT) ed il Tray Agglutination Test (TAT). Il GAT rappresenta il primo macrometodo messo apunto per la determinazione degli anticorpi anti-spermatozoo. E' un test di flocculazione in gelatinache utilizza spermatozoi mobili come antigene; la positività è indicata dalla comparsa di un flocculatodi dimensioni variabili, a seconda dell'intensità della reazione antigene-anticorpo, mentre icampioni negativi appaiono uniformemente torbidi. Il TAT è, invece, un test di microagglutinazioneche rappresenta, ad oggi, per la sua sensibilità e specificità il metodo di elezione fra le tecnichemicroscopiche. Come antigene viene utilizzata una sospensione di soli spermatozoi mobili ottenutamediante “swim-up” (migrazione spontanea degli spermatozoi in un terreno di coltura stratificatosul seme). La lettura viene effettuata con un microscopio rovesciato valutando il numero di spermatozoimobili agglutinati rispetto al totale degli spermatozoi mobili liberi; vengono, inoltre, valutatil'intensità del legame ed il tipo di agglutinazione.Le tecniche “dirette” consentono, invece, di definire la reazione autoimmune a livello della cellulanemaspermica. Fra queste ricordiamo il Mixed Antiglobulin Reaction Test (MAR Test) el'Immunobead Test (IBT). Il MAR Test si basa su una modificazione del Test di Coombs ed è ingrado di rilevare nel liquido seminale gli anticorpi della classe IgG adesi alla superficie nemaspermica.La tecnica prevede l'impiego di eritrociti umani di gruppo 0 Rh+ sensibilizzati con antisieroanti-D incompleto posti a contatto con il liquido seminale da testare e l'antisiero anti-IgG umane.Se gli spermatozoi presentano ASA sulla loro superficie, formeranno con gli eritrociti delle agglutinazionimiste (Fig. 1).Fig. 1 MAR-test51