会 议 报 告 : 国 际 大 会 0 分 组 0 国 内 大 会 0 分 组 0培 养 人 才 : 博 士 后 0 博 士 2 硕 士 2蛋 白 激 酶 C-α 在 尿 浓 缩 功 能 中 的 作 用 机 制 研 究批 准 号 :30871173项 目 负 责 人 : 姚 丽 君所 在 单 位 : 华 中 科 技 大 学既 往 研 究 表 明 , 蛋 白 激 酶 C(PKC)-α 参 与 调 节 肾 脏 尿 浓 缩 功 能 , 其 发 挥 作 用 的 主 要 场所 为 内 髓 集 合 管 上 皮 细 胞 (IMCD)。 水 通 道 蛋 白 2(AQP2) 与 尿 素 转 运 蛋 白 A(UTA, 包 括 A1-3)是 肾 脏 IMCD 中 参 与 调 节 水 和 尿 素 转 运 的 两 种 主 要 转 运 蛋 白 , 它 们 中 任 何 一 种 功 能 缺 失 都 导致 小 鼠 尿 浓 缩 功 能 异 常 。 本 研 究 通 过 使 用 PKC-α siRNA 质 粒 尾 静 脉 注 射 以 及 脂 质 体 转 染 的方 法 构 建 了 PKC-α 基 因 敲 低 小 鼠 以 及 稳 定 转 染 AQP2 以 及 UTA1 的 IMCD3 细 胞 。 采 用 RT-PCR、Western Blot、 激 光 共 聚 焦 显 微 技 术 以 及 免 疫 共 沉 淀 技 术 , 检 测 PKC-α 与 AQP2 以 及 UTA1/A3 的 相 互 关 系 。 本 研 究 发 现 ,PKC-α 通 过 影 响 细 胞 骨 架 蛋 白 的 聚 合 状 态 参 与 调 节 AQP2的 转 运 ,PKC-α 的 活 性 状 态 影 响 PKC-α 与 UTA 以 及 AQP2 的 相 互 作 用 。 此 外 , 采 用 本 实 验 室自 己 制 备 的 UTA1 抗 体 以 及 免 疫 印 迹 技 术 , 本 研 究 发 现 高 渗 可 诱 导 小 鼠 mIMCD3 细 胞 株 表 达UTA2 蛋 白 , 因 此 本 研 究 结 果 拓 宽 了 mIMCD3 细 胞 株 的 使 用 范 围 , 有 助 于 进 一 步 完 善 尿 浓 缩 调节 机 制 , 从 而 为 寻 找 有 效 的 尿 崩 症 治 疗 新 靶 点 提 供 理 论 依 据 。关 键 词 : 蛋 白 激 酶 C-α ; 尿 浓 缩 ; 水 通 道 蛋 白 2; 尿 素 转 运 蛋 白学 科 代 码 :H0507发 表 论 著 :[1]Jin W, Yao X, Wang T, Ji Q, Li Y, Yang X, Yao L. Effects of hyperosmolalityon expression of urea transporter A2 and aquaporin 2 in mouse medullarycollecting duct cells. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2012;32(1):59-64.会 议 报 告 : 国 际 大 会 0 分 组 0 国 内 大 会 0 分 组 0培 养 人 才 : 博 士 后 2 博 士 1 硕 士 5HIF-1α 和 2α 在 肾 脏 晚 期 缺 血 预 适 应 中 的 作 用 及 相 关 功 能 基 因 的 研 究批 准 号 :30871176项 目 负 责 人 : 丁 小 强所 在 单 位 : 复 旦 大 学低 氧 诱 导 因 子 (HIF) 在 细 胞 氧 自 稳 调 节 中 起 关 键 作 用 , 主 要 有 HIF-1α 和 HIF-2α 两种 亚 型 , 在 肾 脏 的 分 布 和 调 控 基 因 不 同 , 对 肾 病 进 展 的 作 用 可 能 亦 有 不 同 。 本 课 题 首 先 建立 了 肾 脏 晚 期 IPC 小 鼠 模 型 , 观 察 IPC 后 不 同 时 间 HIF-1α 、HIF-2α 及 下 游 基 因 VEGF 和GLUT-1 在 肾 小 管 间 质 分 布 、 表 达 和 活 化 情 况 , 研 究 它 们 在 肾 脏 晚 期 IPC 中 各 自 的 作 用 。 结- 97 -
果 发 现 , 晚 期 IPC 可 以 通 过 诱 导 HIF-1α 、HIF-2α 高 表 达 增 加 小 管 细 胞 的 耐 缺 氧 能 力 , 且二 者 在 缺 血 再 灌 注 后 表 达 趋 势 类 似 , 在 肾 组 织 的 细 胞 分 布 不 同 ;HIF 对 晚 期 IPC 的 保 护 作 用可 能 通 过 调 控 VEGF 和 GLUT-1 实 现 的 。 接 着 , 我 们 在 体 外 采 用 siRNA 技 术 分 别 抑 制 HIF-1α和 HIF-2α 表 达 , 观 察 其 在 低 氧 状 态 下 对 HK-2 的 作 用 和 机 制 。 结 果 发 现 ,HK-2 细 胞 中GLUT-1 和 VEGF 的 表 达 和 HIF-1α 、HIF-2α 的 表 达 呈 同 步 变 化 , 分 别 siRNA HIF-1α 或 HIF-2α 均 可 下 调 VEGF 和 GLUT-1 的 表 达 从 而 加 重 低 氧 性 损 伤 。 总 之 ,IPC 通 过 同 时 诱 导 HIF-1α 、HIF-2α 高 表 达 减 轻 缺 氧 所 致 的 肾 损 伤 , 其 机 制 与 同 时 促 进 VEGF 和 GLUT-1 表 达 有 关 。关 键 词 :HIF-1α ;HIF-2α ; 晚 期 缺 血 预 适 应 ; 肾 脏学 科 代 码 :H0511发 表 论 著 :[1]Jiang S, Chen Y, Zou J, Xu X, Zhang X, Liu C, Fang Y, Ding X. Diverse effectsof ischemic pretreatments on the long-term renal damage induced byischemia-reperfusion. Am J Nephrol. 2009;30(5):440-9.[2] 陈 越 , 蒋 素 华 , 朱 加 明 , 钟 一 红 , 傅 辰 生 , 刘 红 , 方 艺 , 丁 小 强 . 小 分 子 RNA 干 扰 沉默 缺 氧 诱 导 因 子 1α 加 重 缺 氧 状 态 肾 小 管 上 皮 细 胞 的 生 长 抑 制 和 坏 死 . 中 华 肾 脏 病 杂志 . 2010;26(7):530-536.[3] 俞 小 芳 , 丁 小 强 , 朱 加 明 , 方 艺 , 邹 建 洲 , 许 讯 辉 , 蒋 素 华 . 5/6 肾 切 除 大 鼠 低 氧 诱导 因 子 1α 和 2α 在 肾 内 的 表 达 和 定 位 . 中 华 肾 脏 病 杂 志 . 2010;26(9):689-695.[4] 蒋 素 华 , 邹 建 洲 , 刘 红 , 任 丽 , 许 迅 辉 , 陈 越 , 丁 小 强 . 通 过 短 时 间 预 缺 血 改 变 肾 小管 上 皮 细 胞 命 运 诱 导 肾 脏 缺 血 耐 受 . 中 华 肾 脏 病 杂 志 . 2011;27(3):198-202.[5] 徐 夏 莲 , 蒋 素 华 , 许 迅 辉 , 刘 红 , 丁 小 强 . 晚 期 缺 血 预 适 应 促 进 低 氧 诱 导 因 子 的 表达 , 减 轻 肾 脏 缺 血 再 灌 注 损 伤 . 中 国 病 理 生 理 杂 志 . 2011;27(2):320-325.会 议 报 告 : 国 际 大 会 0 分 组 0 国 内 大 会 1 分 组 1培 养 人 才 : 博 士 后 0 博 士 2 硕 士 1RGC-32 参 与 TGF-β1 诱 导 肾 小 管 上 皮 向 间 充 质 细 胞 转 化 的 分 子 调 控 机 制批 准 号 :30871177项 目 负 责 人 : 黄 文 彦所 在 单 位 : 复 旦 大 学肾 小 管 上 皮 - 间 充 质 细 胞 转 化 (EMT) 在 肾 间 质 纤 维 化 发 生 发 展 中 发 挥 重 要 作 用 ,TGF-β1 为 EMT 最 重 要 的 诱 导 因 子 , 但 其 确 切 的 分 子 调 控 机 制 尚 远 不 清 楚 。 晚 近 我 们 的 工 作 提 示Response Gene to Complement 32(RGC-32) 为 TGF-β 1 信 号 激 活 通 路 下 游 关 键 的 转 录 调 控 因子 , 但 其 参 与 调 控 EMT 的 分 子 机 制 不 详 。 本 研 究 在 体 外 培 养 正 常 大 鼠 肾 小 管 上 皮 细 胞(NRK-52E) 基 础 上 ,(1) 利 用 基 因 克 隆 , 基 因 转 染 , 凝 胶 电 泳 迁 移 分 析 (EMSA), 染 色 体 免 疫共 沉 淀 等 技 术 , 明 确 TGF-β 1 诱 导 EMT 过 程 中 , 与 TGF-β 1 相 关 的 RGC-32 基 因 启 动 子 及 其调 控 元 件 。(2) 利 用 阻 断 已 知 TGF-β 1 下 游 信 号 通 路 , 过 表 达 和 抑 制 RGC-32 等 手 段 , 初 步 了解 RGC-32 参 与 调 控 EMT 可 能 的 信 号 通 路 以 及 信 号 通 路 间 的 串 话 调 节 。 从 而 为 阐 明 TGF-β 1介 导 EMT 的 分 子 机 制 提 供 理 论 依 据 。- 98 -
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