æ³Œå°¿ã€ç”Ÿæ®–ã€å† åˆ†æ³Œç³»ç»Ÿ - 国家自然科学基金委员会医学科学部

胚 胎 细 胞 的 正 常 分 裂 是 胚 胎 发 育 过 程 中 的 关 键 环 节 。 关 卡 蛋 白 Bub1 表 达 下 调 可 导 致细 胞 分 裂 中 染 色 体 异 常 , 进 而 影 响 细 胞 增 殖 和 胚 胎 发 育 , 但 该 过 程 中 Bub1 表 达 的 调 控 机 理尚 不 清 楚 。 新 近 发 现 microRNA(miRNA) 是 真 核 细 胞 中 一 大 类 参 与 基 因 转 录 后 调 控 的 非 编码 小 分 子 RNA, 与 胚 胎 发 育 、 干 细 胞 分 化 等 有 关 。 生 物 信 息 学 分 析 ,Bub1 可 能 是 miRNA-30a、30e、494、467a、467e、450a-3p、466a-3p 和 297b 的 靶 蛋 白 。 前 期 实 验 证 实 , 在 自然 流 产 胚 胎 中 Bub1 蛋 白 表 达 水 平 明 显 低 于 正 常 组 织 中 , 而 其 mRNA 水 平 却 无 明 显 变 化 ,提 示 有 可 能 存 在 miRNA 这 种 转 录 后 调 控 机 制 。 本 课 题 成 功 证 实 了 ⑴Bub1 是 miR-450a-3p 的靶 基 因 ,(2) 体 外 试 验 , 利 用 miRNA 模 拟 体 探 讨 Bub1 蛋 白 对 小 鼠 成 纤 维 细 胞 增 值 、 凋 亡 和 周期 的 影 响 。⑵ 体 内 试 验 , 受 精 卵 微 注 射 miR-450a-3p 模 拟 体 , 通 过 下 调 Bub1 表 达 , 观 察 其 对受 精 卵 分 裂 和 增 殖 的 影 响 。 本 课 题 阐 明 了 miRNAs 可 能 在 转 录 后 水 平 参 与 了 靶 基 因 Bub1 的调 控 , 最 终 影 响 胚 胎 细 胞 分 裂 的 机 制 , 可 为 临 床 提 高 妊 娠 质 量 和 防 治 胚 胎 发 育 异 常 导 致 的早 期 自 然 流 产 奠 定 基 础 。关 键 词 :microRNAs;Bub1; 胚 胎 发 育 ; 细 胞 分 裂学 科 代 码 :H0417发 表 论 著 :[1] Qiong Shi, Min Hu, Min Luo, Qiang Liu, Fengbing Jiang, Yan Zhang, SujiaWang, Chen Yan, and YaguangWeng. Reduced expression of Mad2 and Bub1 proteins is associated with spontaneous miscarriages. Mol. Hum. Reprod., 2011; 17 (1): 14-21.会 议 报 告 : 国 际 大 会 0 分 组 0 国 内 大 会 0 分 组 0培 养 人 才 : 博 士 后 0 博 士 1 硕 士 4BRG1/H2AX 调 节 精 子 DNA 损 伤 受 精 后 修 复 的 机 制 研 究批 准 号 :30872772项 目 负 责 人 : 李 忠 香所 在 单 位 : 浙 江 省 医 学 科 学 院成 熟 精 子 的 DNA 损 伤 必 须 依 赖 卵 细 胞 来 源 的 相 关 蛋 白 完 成 受 精 后 修 复 ,Brg1 蛋 白 参与 体 细 胞 DNA 损 伤 修 复 , 但 是 卵 细 胞 来 源 的 Brg1 蛋 白 是 否 参 与 受 精 后 精 子 DNA 损 伤 修 复还 不 清 楚 。 本 研 究 成 功 建 立 了 小 鼠 精 子 DNA 损 伤 的 细 胞 外 修 复 体 系 , 并 且 发 现 经 过 该 体 系孵 育 后 精 子 DNA 损 伤 能 完 全 修 复 , 而 去 除 修 复 体 系 中 Brg1 蛋 白 则 阻 碍 精 子 DNA 损 伤 修复 ; 此 外 , 利 用 免 疫 荧 光 双 标 记 和 免 疫 共 沉 淀 技 术 发 现 精 子 DNA 损 伤 修 复 过 程 中 Brg1/H2AX 形 成 共 定 位 和 蛋 白 复 合 体 。 进 一 步 研 究 还 发 现 , 抑 制 ATM 活 性 能 够 影 响 Brg1 在 精 子 DNA 损 伤 位 点 结 合 以 及 精 子 DNA 损 伤 修 复 。 上 述 研 究 结 果 表 明 , 卵 细 胞 来 源 Brg1 可 能 参 与精 子 DNA 损 伤 的 受 精 后 修 复 , 该 修 复 过 程 依 赖 ATM 酶 的 激 活 , 并 且 依 赖 Brg1/H2AX 复 合体 的 形 成 。 在 本 项 目 支 持 下 , 目 前 已 经 发 表 SCI 论 文 2 篇 , 正 在 撰 写 论 文 1 篇 , 培 养 硕 士研 究 生 1 名 。关 键 词 : 精 子 ;DNA 损 伤 ;DNA 修 复 ;H2AX;BRG1- 51 -