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durch Anlegen einer Heizspannung. Die dafür notwendigen Strom- bzw. Spannungswerte wurden vorher durch die in Kapitel 4.5 beschriebene Temperaturkalibrierung bestimmt. Bei den Versuchen mit der Scheibenelektrode wurde dieser Elektrodentyp zusätzlich mit 1000 U/min gedreht. Im Gegensatz dazu ist ein Rühren bei den heizbaren Elektroden nicht notwendig, da diese beim Heizen die notwendige Konvektion selbst erzeugen. Die Messung wurde nach Abspülen der Elektrode mit Messpuffer in einer Messzelle von Metrohm mit 20 ml Puffer bei Raumtemperatur durchgeführt. Als Messverfahren wurde für die Versuche mit den Ferrocen- und die Dabcyl-markierten Targets die Wechselstromvoltammetrie verwendet. Bei den Os-modifizierten Oligonukleotiden hingegen kam die Square Wave Voltammetrie zum Einsatz. Die ACV- Messungen erfolgten bei einer Frequenz von 10 Hz in einem Potentialbereich von 0 bis 0,55V vs. Ag/AgCl für Ferrocen bzw. von -0,6 bis 0V vs. Ag/AgCl für Dabcyl. Die Bestimmung des Osmium-markierten Targets wurde mit 200 Hz in einem Bereich von -0,55 bis 0 V vs. Ag/AgCl durchgeführt. Nach Bestimmung des Hybridisierungssignals wurde die Scheibenelektrode 30 sec. in 50-60 °C heißen destillierten Wasser dehybridisiert. Bei den geheizten Elektroden geschah das durch Anlegen eines Heizstromes von 670 mA für die Draht- bzw. 5,5 V Heizspannung für die LTCC-Elektrode in destilliertem Wasser bei Raumtemperatur. Die auf diese Art eingestellte Temperatur entspricht der bei der Scheibenelektrode. Die Elektroden wurden nach der Dehybridisierung für die nächste Hybridisierung eingesetzt. Der Hybridisierungs-Dehybridisierungs-Zyklus konnte dabei mehrmals wiederholt werden bevor ein deutlicher Signalverlust eintrat. So konnten bei den SAM`s mit der Monothiolsonde bis zu 6 Hybridisierungen, bei denen mit der Sonde mit 6 Schwefelatomen im Linker bis zu 15 Hybridisierungen bestimmt werden. 44
4.4 Sequenzen der verwendeten Nukleinsäuren Name d. Oligomers Kürzel Nukleinsäure- Sequenz Sonde FS 5`-TGC GGA TAA CAC AGT CAC CT- Thiol-3` Sonde EcoR EcoR 5`-ATT GGC CCG TAA GGC GAA TT- Thiol-3` Sonde-Disulfit FSS 5`- TGC GGA TAA CAC AGT CAC CT- (Dithiol) 2 -3` Sonde-FSS6 FSS6 5`- TGC GGA TAA CAC AGT CAC CT- (Dithiol) 3 -3` Ferrocen-Target FcT 5`-XAG GTG ACT GTG TTA TCC GCA-3` Ferrocen-NC- NC 5`-XGA GGT ATC Target GGT TAT TGC CCA-3` Target-Dabcyl TDT 5`-XAG GTG ACT GTG TTA TCC GCA-3` Target-T 5`-TTT TTA GGT GAC TGT GTT ATC CGC A-3` Target-T-Os TOs 5`-XAG GTG ACT GTG TTA TCC GCA-3` Modifizierung OH-(CH 2 ) 3 -S-S- (CH 2 ) 3 - OH-(CH 2 ) 3 -S-S- (CH 2 ) 3 - Dithiol-Monomere durch PO 4 - Ester verbunden a Dithiol-Monomere durch PO 4 - Ester verbunden a Ferrocen- C6UniLink Ferrocen- C6UniLink 5-Dabcyl T-Pentamer [OsbpyT] - Pentamer Lieferant FRIZ Biochem GmbH Operon GmbH Operon GmbH FRIZ Biochem GmbH FRIZ Biochem GmbH FRIZ Biochem GmbH FRIZ Biochem GmbH Operon GmbH Operon GmbH aus Target-T synthetisiert. Tab. 4.1.: Verwendete Nukleinsäureoligomere mit Modifizierungen. a s. Abb. 3.5 45
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Abb. 7.3 : Schematische Darstellung
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Abb. 5.14: ACV-Peak von 80 nM Ferro
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Literatur 1 Hershey, A.D.; Chase, M
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30 Hinnen, C.; Rousseau, A.; Parson
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55 Zhu, N.; Zhang, A.; Wang, Q.; He
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159 Munakata, H.; Oyamatsu, D.; Kuw
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