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5.3.4 Vergleich der Marker Marker Detektionsbereich Dabcyl > 10 7 M Fluoreszin - Texas Red - Ferrocen > 10 9 M [OsO 4 (bipy)]- > 10 9 M Komplex Tab. 5.1.: Verwendete Marker und Detektionsbereich Wie aus Tab. 5.1 zu erkennen ist, eignet sich von den optischen Markern das Dabcyl zur Detektion der Hybridisierung von Nukleinsäuren. Allerdings liegt der Detektionsbereich weit über dem der Ferrocen- und Osmium-markierten Targets. Die Ursache dafür liegt in dem irreversiblen Reaktionscharakter der Dabcyl-Markierung. 5.4 Einfluss der Reaktionsparameter auf das Hybridisierungssignal In diesem Kapitel soll der Einfluss der Reaktionsparameter an der Scheibenelektrode beschrieben werden. Grundlage dafür bilden die nur mit dieser Elektrode durchgeführten Versuche. 5.4.1 Konvektion an der Elektrodenoberfläche Um die für unsere Versuchsanordnung mit der rotierenden Scheibenelektrode optimale Drehzahl zu bestimmen, wurde das Hybridisierungssignal nach 4 min bei verschiedenen Drehzahlen ermittelt. Durch die Rotation der Scheibenelektrode wird eine drehzahlabhängige Konvektion der Probenlösung an der Elektrodenoberfläche verursacht. Dadurch ist es möglich mit dieser Versuchsreihe auch eine Aussage über den Einfluss der Konvektion während der Hybridisierung auf das Signal zu treffen. 70
Abb. 5.16: Einfluß der Drehzahl auf das Hybridisierungssignal bei 7(leer) und 23°C(voll) in 10 mM TRIS Wie aus der Abb. 5.16 zu erkennen ist, konnte bei Raumtemperatur im Bereich von 0-500 U/min ein sehr starker Anstieg des Signals nachgewiesen werden, dieser flachte bis 1000 U/min stark ab und ging mit zunehmender Drehzahl in ein Plateau über. Dieses Verhalten bei der voltammetrischen Analyse kleinerer Analyten als Nukleinsäuren ist bereits seit den 60er Jahren bekannt. So beobachteten bereits 1962 Azim und Riddiford bei Versuchen mit einer Elektrode ähnlichen Typs mit Kaliumhexacyanoferrat im Bereich von 0 bis 559 U/min eine Sättigung des Reduktionssignals 170 . Spätere Messungen mit anderen einfachen Ionen und niedermolekularen organischen Verbindungen bestätigten einen Einfluss der Rotationsgeschwindigkeit auf das Messsignal. Der Einsatz dieser Technik bei der Detektion von Nukleinsäuren wurde bisher noch nicht untersucht. Lediglich Vanderhoeven et al. unternahmen 2005 einen ähnlichen Versuch mit einer drehbar gelagerten Hybridisierungskammer, allerdings nur in einem Drehzahlbereich von weniger als 150 U/min bei dem die Sättigung noch nicht erreicht wurde 171 . Die Tatsache, dass es im Drehzahlbereich ab 1000 U/min zur Ausbildung eines Plateaus kommt, beweist, dass für das Signal nicht die Anströmgeschwindigkeit zur 71
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11 Jahre später gelang Burgi und H
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Ursprünglich erfolgte die elektroc
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So detektierten Millian und Mikkels
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quinolin-quinon (PQQ) als Markierun
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Platindraht, mit einem 250 kHz Wech
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2. Aufgabe Wie aus Kapitel 1.1 zu e
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stark verkleinert, dass eine Implan
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halber erwähnt werden 112,113,114,
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kombination ermöglicht die Ausbild
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