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5.4.3 Temperatur während der Hybridisierung
Der Einfluss der Hybridisierungstemperatur ist in der folgenden Abbildung
dargestellt.
Abb. 5.19: Einfluss der Hybridisierungstemperatur auf das Hybridisierungssignal von 800
nM Target-Dabcyl nach 8 min und 1000 U/min in 10 mM Tris pH 7,5
Die Messungen erfolgten nach einer 8 min langen Hybridisierung in einem temperierten
Becherglas mit 3 ml 800 nM dabcylmarkierter Targetlösung unter Rühren.
Dabei konnte nur eine geringe Erhöhung des Signals im Bereich von 23 bis 40 °C
beobachtet werden, danach erfolgte ein Abfallen des Signals bis auf den Ausgangswert
der Messung. Die Erhöhung des Hybridisierungssignals bis zu einem
Optimum der Hybridisierungstemperatur wurde auch von Fojta et al. 172 und von
Flechsig et al. 151 mit Osmium-markierten Targets beobachtet. Das Temperaturoptimum
für die Hybridisierung lag bei der Arbeitgruppe Fojta bei etwa 27 °C. Die
Abweichung lässt sich dadurch erklären, dass dafür eine andere Sequenz verwendet
wurde. Flechsig hingegen konnte das Temperaturoptimum mit diesem Target an der
Scheibenelektrode bestätigen. Die geringe Signalerhöhung lässt sich durch die
irreversible Reaktion der Markierung und die durch die hohe Konzentration des
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