2. Material und Methoden - ArchiMeD

ERGEBNISSE
SSW) (C. Morton, unveröffentlicht). Mit keiner der beiden Sonden konnte ein positiver Klon
aus der Cochlea-Bibliothek isoliert werden. Auch mit Hilfe der UniGene-Datenbank konnten
keine weiteren überlappenden EST-Klone identifiziert werden.
3.2.3.2 Chromosomale Lokalisation des EST-Klons Efc34
Die chromosomale Lokalisation des Klons Efc34 erfolgte mittels Fluoreszenz in-situ-
Hybridisierung. Zunächst wurde durch PCR mit der Primerkombination P34.1F/P34.1R ein
PAC-Klon aus einer hierarchisch angelegten PAC-Bank des humanen Genoms (Ioannou et al.,
1994) isoliert. Die Verifizierung des Klons erfolgte durch direkte Sequenzierung der PAC-
DNA mit Efc34-spezifischen Primern. Die Hybridisierung der PstI-restringierten, mit
Digoxygenin-11-dUTP markierten DNA auf gespreiteten Metaphasechromosomen zeigte ein
Signal auf dem kurzen Arm von Chromosom 1 (Abb. 27).
Die Lokalisation konnte später durch Homologievergleich mit der htgs-Datenbank bestätigt
werden. Es zeigte sich eine Homologie zu dem humanen Klon 134019 (Accession Nr.:
AL034555), der aus der chromosomalen Region 1p36.11-36.33 stammt.
Abb. 27: Fluoreszenz in-situ-Hybridisierung des PAC-Klons “PDJ183R8S11”
an humanen Metaphasechromosomen. Die PAC-Sonde wurde mit anti-DIG-TRITC detektiert und zeigt
Signale auf beiden Chromatiden der chromosomalen Region 1p36.
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