2. Material und Methoden - ArchiMeD

ERGEBNISSE
2480 CGGGGTGCCTCAGTACGCGTTCCTGCAGTACTGTGATATCGCTAGTGTGTGTAAGGCCATCAAGAAG
G V P Q Y A F L Q Y C D I A S V C K A I K K 428
2547 ATGGACGGAGAGTACCTTGGAAATAACCGCCTCAAGCTGGGTTTTGGAAAGAGCATGCCTACCAACT
M D G E Y L G N N R L K L G F G K S M P T N 450
2614 GTGTGTGGTTAGATGGGCTTTCTTCAAATGTGTCCGATCAGTATTTAACTCGGCATTTCTGCCGATA
C V W L D G L S S N V S D Q Y L T R H F C R Y 473
2681 CGGACCTGTGGTAAAGGTGGTGTTTGACCGCTTGAAAGGCATGGCTCTGGTTCTCTACAGCGAGATC
G P V V K V V F D R L K G M A L V L Y S E I 495
2748 GAGGATGCACAGGCGGCTGTCAAGGAGACCAAGGGCAGGAAAATTGGTGGGAATAAGATTAAGGTGG
E D A Q A A V K E T K G R K I G G N K I K V 517
2815 ACTTTGCAAATCGGGAAAGCCAACTGGCATTTTATCACTGCATGGAGAAATCTGGTCAGGATATGAG
D F A N R E S Q L A F Y H C M E K S G Q D M R 540
2882 AGACTTCTATGAAATGCTAACAGAGAGAAGGGCAGGGCAGATGGCTCAGTCCAAGCATGAAGACTGG
D F Y E M L T E R R A G Q M A Q S K H E D W 562
2949 AGTGCAGATGCCCAGAGCCCACATAAATGCCGAGAGGAACGAAGAGGGTCCTATGAGTACAGTCAAG
S A D A Q S P H K C R E E R R G S Y E Y S Q 584
3016 AACGGACATACTATGAAAATGTTCGCACTCCAGGCACCTACCCTGAGGACTCCAGGAGGGACTATCC
E R T Y Y E N V R T P G T Y P E D S R R D Y P 607
3038 GGCTCGGGGGAGAGAGTTTTACTCGGAGTGGGAGACGTACCAAGGAGAGTATTATGACTCCCGGTAC
A R G R E F Y S E W E T Y Q G E Y Y D S R Y 629
Abb. 30: Nukleotidsequenz und abgeleitete Aminosäuresequenz des mfc34-Gens
Die durchgehende Numerierung der Nukleotide ist links, die Aminosäurenumerierung ist am rechten Seitenrand
angegeben. RRM-Motive sind eingerahmt. Das wahrscheinlich alternativ gespleißte 1208 Bp-Exon ist
unterstrichen. Das alternative gespleißte 99 Bp Exon ist rot, das 69 Bp Exon ist blau gekennzeichnet. Der Beginn
und das Ende des Ursprungsklons Efc34 ist durch Pfeile gekennzeichnet. Abgebildet sind nur die ersten 629
Aminosäuren, die weitere Sequenz entspricht der unter der Accession-Nummer AF156529 abgelegten Sequenz.
3.2.3.5 Northern Analyse zur Bestimmung der Transkriptgröße von mfc34
Zur Bestimmung der Transkriptgröße von mfc34 wurde eine radioaktiv markierte Sonde mit
einem Northern Blot (Clontech) hybridisiert. Die Sonde wurde durch RT-PCR aus Maus-
Gesamt RNA (E14,5) mit den Primern P34.1F und P34.1R generiert und radioaktiv markiert
(siehe 2.7.1). Auf dem Autoradiogramm des Northern-Blots, der in jeder Spur jeweils 2 µg
Poly(A) + -RNA auf verschiedenen Entwicklungsstadien der Maus enthielt, zeigt sich, dass das
Gen wahrscheinlich in zwei alternativen Formen exprimiert wird. Nach dreitägiger Exposition
konnte bei dem Entwicklungsstadium E7 ein etwa 12 kBp und ein ca. 4,6 kBp großes
Transkript nachgewiesen werden. Bei den Entwicklungsstadien E11 und E17 konnte nur das
kleinere Transkript und bei E15 nur das große Transkript nachgewiesen werden (Abb. 31).
Die Northern-Blot Analyse bestätigt das durch RT-PCR ermittelte Ergebnis, dass mfc34 in
Form unterschiedlich großer Transkripte vorliegt. Im Northern-Blot sind nur die Transkripte
99