2. Material und Methoden - ArchiMeD

DISKUSSION
knorpelspezifischer Bestandteil, konnte wahrscheinlich aufgrund der geringen Anzahl der
analysierten „Tags“ nicht erbracht werden. Ziel der vorliegenden Arbeit war zunächst die
Etablierung und Evaluierung der SAGE-Methode. Es konnte gezeigt werden, dass die
prinzipielle Durchführbarkeit der SAGE-Methode möglich ist und, dass SAGE eine
brauchbare Technik darstellt z. B. Veränderungen der Expression von mesodermalen Zellen
die in Richtung Chondrozyten differenzieren zu untersuchen. Ein geeignetes Modellsystem
zur Untersuchung der Faktoren, die bei der Chondrozytendifferenzierung eine Funktion
übernehmen, könnte die Zelllinie ATDC5 darstellen. ATDC5 wurde aus der murinen
Teratokarzinom-Linie AT805 isoliert. Die Zellen differenzieren nach Zugabe von Insulin und
bilden knotenähnliche Zell-Aggregate, die Knorpel-spezifische Proteoglykane und Typ II
Kollagen produzieren (Atsumi et al. 1990). Durch die Herstellung und den anschließenden
Vergleich der Expressionsprofile von SAGE-Bibliotheken aus undifferenzierten und
differenzierten ATDC5 Zellen könnten nicht nur Rückschlüsse über Chondrozyten-spezifische
Faktoren gewonnen werden, die Bibliotheken würden auch eine Grundlage zum Vergleich mit
anderen Bibliotheken bilden. Zum Beispiel können Expressionunterschiede zwischen
Osteoblasten und Chondrozytendifferenzierung untersuchen werden. Die SAGE-Methode
wurde bereits zur Identifizierung von Osteoblasten- bzw. Adipozytenspezifischen Gene
angewendet. Ji et al. (2000) zeigte, dass durch die Behandlung einer mesenchymalen
Vorläufer-Zelllinie (3T3-F442A) mit BMP-2 die Zellen zu Osteoblasten und Adipozyten
differenzieren. Durch Herstellung von SAGE-Bibliotheken aus BMP-2-behandelten bzw. aus
unbehandelten Zellen konnte die differenzielle Expression einiger Gene nachgewiesen
werden.
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