2. Material und Methoden - ArchiMeD

ERGEBNISSE
eine Blaufärbung noch ein Signal im Autoradiogramm zeigten, wurden anschließend in SM-
Medium überführt und über T3A/T7A-PCR amplifiziert. Die Sequenzierung und die
anschließende Auswertung der Sequenzdaten der aufgereinigten PCR-Produkte erfolgte am
Baylor College (Houston, Texas). Die erhaltenen Sequenzdaten sind unter der web-Adresse
http://www.hgsc.bcm.tms.edu/~gmei/cDNA/CUAA/aaa.htm abgelegt.
Die Auswertung der Sequenzdaten ergab, dass 73% (162) der ESTs Homologie zu bekannten
Genen zeigen. 22% (8) zeigen dabei Homologie zu verschiedenen ribosomalen Proteinen,
jeweils 1,8% weisen Sequenzübereinstimmung zu Elongationfaktor 1 α bzw. Ferritin auf und
1,3% der untersuchten ESTs sind identisch mit Kollagen Typ II. 5% der untersuchten ESTs
stellen repetitive Sequenzabschnitte dar, 9,5% zeigen Homologie zu PAC, BAC- bzw.
Cosmidsequenzen. 11% zeigen nach Vergleich gegen die nr-Datenbank keine signifikante
Homologie.
Die weitere Auswertung dieser Ergebnisse und die Untersuchung der gefundenen Gene ist
Ausgangspunkt einer Promotionsarbeit und wird in dieser Arbeit nicht weiter beschrieben.
3.2.3 Isolierung und Analyse des EST-Klons Efc34
3.2.3.1 Analyse von Efc34
Wie bereits unter 3.2.1.2 beschrieben, zeigt der EST-Klon Efc34 in ersten
Homologievergleichen auf Nukleotidebene eine 81%ige Homologie zu einem aus einer
murinen Cochlea-cDNA-Bibliothek isolierten EST-Klon (Abb. 23). Zu humanen Sequenzen
konnte keine Homologie nachgewiesen werden. Zur Ermittlung der vollständigen Sequenz-
information wurde der Phagenklon durch in-vivo-Excision (siehe 2.9.1) in pBluescript-Vektor
umkloniert. Mit Hilfe der vektorspezifischen Primer T3A und T7A konnte das gesamte
Integrat sequenziert werden. Die Sequenz ist in Abb. 24 dargestellt. Sie umfasst 693 Bp und
beinhaltet Polyadenylierungstelle und poly(A)-Sequenz.
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