2. Material und Methoden - ArchiMeD

ERGEBNISSE
Abb. 13: Northern Blot Analyse transfizierter 293-Zelllinien
Das dargestellte Autoradiogramm eines Northern Blots, mit jeweils 15 µg poly (A+) RNA wurde nach
Hybridisierung mit dem radioaktiv markiertem FGFR3-spezifischem PCR-Produkt E/F und einer
Exposition von 18 Stunden erhalten. Aufgetragen sind RNAs verschiedener mit FGFR3 stabil
transfizierter 293-Zellinien (239-FGFR3 #9, -#10, -#12, -#14 und -#62). Nur die 293-FGFR3 #14-RNA
zeigte eine starke Expression eines 4 kBp-Fragments. Die anderen Zellinien scheinen FGFR3 nur
schwach bzw. mehrere Transkripe zu exprimieren. In unbehandelten 293-Zellen bzw. in Zellen, die mit
dem leeren Vektor (293-pcDNA) transfiziert wurden, konnte keine FGFR3-Expression nachgewiesen
werden.
Das untere Autoradiogramm zeigt den gleichen Northern Blot nach Hybridisierung mit einer Aktin-
Sonde und Exposition von einem Tag.
Dieses Ergebnis konnte durch Western Blot-Analyse bestätigt werden (Abb. 14). FGFR3 liegt
in der Zelle in drei unterschiedlichen Formen vor. Eine nicht-glykosylierte 97 kDa-Form, eine
wahrscheinlich unausgereifte 125 kDa-Form, sowie eine fertig prozessierte 135 kDa-Form
(Keegan et al., 1991). Die Zellinie #9, #12 und #14 zeigten deutliche Expression der 97 kDa-
Form sowie der beiden größeren, glykosylierten Formen, die wahrscheinlich aufgrund
geringer Größenunterschiede nicht als Einzelbanden erkennbar sind. Aufgrund der Northern-
und der Western-Blot Analyse wurden alle weiteren Experimente mit der 293-FGFR3- #14
Zellinie durchgeführt.
9.49
7.46
4.40
2.37
1.35
kBp
Aktin
293-FGFR3-#9
293-FGFR3-#10
293-FGFR3-#12
293-FGFR3-#14
293-pcDNA-#5
293-pcDNA-#62
293
60