2. Material und Methoden - ArchiMeD

ERGEBNISSE
Wasmuth zur Verfügung gestellt. Die DNA der Klone pC385.1 und pC385.12 wurde jeweils
mit den Restriktionsenzymen BamH1 und Pst1 verdaut. Der Vergleich der Bandenmuster der
beiden Klone zeigt weitgehende Übereinstimmung der Fragmentgrößen (Abb. 5). Daraus kann
geschlossen werden, dass die beiden Cosmide teilweise überlappende Regionen inseriert
haben. Durch Hybridisierungsexperimente mit spezifischen Sonden aus dem 5´- (nt 172- nt
624) bzw. 3´-Bereich (nt 2208 - nt 2487) der bis dahin veröffentlichten FGFR3-
Sequenzinformation (Acc. Nr.: M58051, Keegan et al., 1991) konnte gezeigt werden, dass das
Cosmid pC385.1 die gesamte FGFR3-Sequenzinformation enthält (keine Abbildung). Dieser
Klon wurde zur weiteren Aufklärung des genomischen Aufbaus herangezogen.
Abb. 5: Gelelektrophoretische Auftrennung der Restriktion der Cosmidklone 385.1 und 385.12.
23130
9416
6557
4361
2322
2027
564
Bp
M1 1 2 3 4 M2
Der Vergleich der Bandenmuster nach Restriktion von 385.1 (Spur 1) und 385.12 (Spur 2) mit Bam H1
zeigt weitgehende Übereinstimmung, wohingegen der Verdau mit Pst 1 von 385.1 (Spur 3) bzw. 385.12
(Spur 4) einige Unterschiede erkennen lässt.
Molekulargewichtsstandart M1: HindIII restringierte λ-DNA, M2: 100 bp Leiter. Die Auftrennung
wurde auf einem 1,2%igen Agarose-gel durchgeführt.
Versuche, das 5´-Ende der FGFR3-mRNA durch die Primer-Extension Methode genau zu
analysieren schlugen fehl, da wahrscheinlich aufgrund sehr starker Sekundärstrukturen die
Amplifikation des 5´-Bereichs des Gens nicht möglich war. Deshalb wurde der weiter 5´-
wärts gelegene Sequenzabschnitt der bereits bekannten FGFR3-Sequenz des humanen
FGFR3-Gens durch eine “Primerwalking”-Strategie weiter untersucht. Ausgehend von Primer
C1 (siehe 2.15.6) wurde die Cosmid-DNA pC385.1 direkt sequenziert. Aus den resultierenden
Einzel-sequenzen wurde eine Konsensussequenz erstellt, die in Abb. 6 abgebildet ist.
Insgesamt wurden 916 Bp vor dem bekannten Translations-Initiationsstart sequenziert.
1000
500
Bp
45