2. Material und Methoden - ArchiMeD

INHALTSVERZEICHNIS
3.2.3 Isolierung und Analyse des EST-Klons Efc34 90
3.2.3.1 Analyse von Efc34 90
3.2.3.2 Chromosomale Lokalisation des EST-Klons Efc34 93
3.2.3.3 Isolierung eines homologen Maus-Gens mfc34 94
3.2.3.4 Verifizierung und Analyse der ermittelten mfc34 Gensequenz 96
3.2.3.5 Northern Analyse zur Bestimmung der Transkriptgröße von mfc34 99
3.2.3.6 Chromosomale Lokalisation von mfc34 101
3.3 Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) 103
3.3.1 Herstellung einer Chondrosarkom-SAGE-Bank 105
3.3.2 Auswertung der Sequenzdaten 108
4 Diskussion 112
4.1 Das humane FGFR3-Gen 112
4.1.1Merkmale der FGFR-Familie 112
4.1.2 Die genomische Struktur des humanen FGFR3-Gens in Vergleich mit der murinen
Fgfr3 Sequenz 113
4.1.3 Klinisches Spektrum der FGFR3-Defekte und ihre molekulare Ursache 115
4.1.4 Mutationsanalyse 118
4.1.5 Expression alternativer Spleißvarianten des murinen Fibroblasten-Wachstumsfaktor-
Rezeptor 3 (Fgfr3) 123
4.2 Methoden zur Identifizierung differenziell exprimiertere Gene 124
4.3 Analyse von EST-Klonen aus einer humanen Chondrozyten-cDNA-Bank 129
4.3.1 Homologievergleich der erhaltenen EST-Sequenzen 130
4.3.2 Gesamtbewertung der durchgeführten Sequenzierungen 134
4.3.3 Detaillierte Analyse des Klons Efc34 135
4.4 Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) 137
5 Zusammenfassung 140
6 Literaturverzeichnis 142
7 Anhang 155
7.1 Danksagung 155
7.2 Lebenslauf 156
7.3 Veröffentlichungen 158
III