2. Material und Methoden - ArchiMeD

Verzeichnis der Abbildungen
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
Abb. 1: Schematische Darstellung der Extremitätenentwicklung 3
Abb. 2: Gliedmaßenentwicklung, Achsen und beteiligte Gene 5
Abb. 3: Röhrenknochen, Wachstumsfuge, Aufbau und Genexpression 7
Abb. 4: Aufbau des FGFR-Rezeptor 3 44
Abb. 5: Gelelektrophoretische Auftrennung der Cosmidklone 385.1 und 385.12 45
Abb. 6: Nukleotidsequenz der 5´-flankierenden Region des humanen FGFR3-Gens 46
Abb. 7: Vergleich der humanen mit dem murinen 5´-Bereich des FGFR3-Gen 47
Abb. 8: PCR-Strategie zur Ermittlung der Exon/Intron-Struktur des humanen FGFR3-Gens 49
Abb. 9: Sequenzierungsstrategie des mit der Primerkombination C/F amplifizierten PCR-
Fragments 50
Abb. 10: Schematische Darstellung der genomischen Struktur von FGFR3 51
Abb. 11: De novo Mutationsnachweis im FGFR3-Gen eines Hypochondroplasie Patienten 57
Abb. 12: Dreidimensionale Struktur der modellierten IgIII-Domäne von FGFR3 58
Abb. 13: Northern Blot Analyse transfizierter 293-Zelllinien 60
Abb. 14: Western Blot Analyse transfizierter 293-Zellen 61
Abb. 15: Inhibierung der Glykosylierung durch Tunicamycin 62
Abb. 16: Aufbau und Sequenz des alternativ gespleißten Bereichs des FGFR3-Gens mit
abgeleiteten Hybridisierungssonden 63
Abb. 17: Im Dunkelfeld aufgenommene Autoradiogramme von sich entwickelnden Mäusen
hybridisiert mit spezifischen Sonden [FGFR3-IIIc: A, B, D; Exon FGFR3-IIIb: C,
E] und einer Negativkontrolle 66
Abb. 18: Expressionsmuster von FGFR3 in der Blase bzw. in der Wirbelsäule der Maus am
Tag E20 der Entwicklung 67
Abb. 19: DNA-Sequenzvergleich des EST-Klons Efc190 mit der EST-Datenbank 81
Abb. 20: Peptidsequenzvergleich des EST-Klons Efc190 mit BLASTX 82
Abb. 21: Schematische Darstellung der Vorgehensweise zur Isolierung weiterer Klone aus
der humanen Chondrozyten cDNA-Bank 88
Abb. 22: Herstellung spezifischer Sonden 89
Abb. 23: DNA-Sequenzvergleich des 5´-Bereichs von EST-Klon Efc34 mit einem murinen
cDNA-Klon 91
Abb. 24: Sequenz des EST-Klons Efc34 91
Abb. 25: DNA-Sequenzvergleich des 3´-Bereichs von EST-Klon Efc34 mit einer humanen
cDNA-Sequenz 92
Abb. 26: Aminosäurevergleich des humanen EST-Klons Efc34 mit einem RNA-
Erkennungsmotiv von Drosophila melanogaster 92
Abb. 27: Fluoreszenz in situ-Hybridisierung des PAC-Klons „PDJ183R8S11“ 93
Abb. 28: Sequenzierungsstrategie des murinen Klons mfc34 95
Abb. 29: Schematische Darstellung aller möglichen Spleißvarianten 97
Abb. 30: Nukleotidsequenz und abgeleitete Aminosäuresequenz des mfc34 Gens 99
Abb. 31: Northern Blot Analyse des murinen mfc34 Gens 100
Abb. 32: Dot Blot Analyse des murinen mfc34 Gens 101
Abb. 33: Lage von mfc34 auf Maus-Chromosom 4 102
Abb. 34: Graphische Darstellung der SAGE-Methode 104
Abb. 35: „SYBR-Green“-gefärbte Polyacrylamid-Gele mit Beispielen verschiedener Schritte
der SAGE-Methode 107
Abb. 36: Überblick über alle bisher beschriebenen Mutationen im FGFR3-Gen und die
damit assoziierten Erkrankungen 120
Abb. 37: Die humane FGFR3-Aminosäure-Sequenz der Immunglobulin-Domäne IIIc im
Vergleich mit FGF-Rezeptoren anderer Spezies 122
IV