2. Material und Methoden - ArchiMeD

DISKUSSION
Gen für Tumor-Nekrose-α-Rezeptor 2 (TNFαR2) diskutiert (Deveto et al., 1998). Ein
funktioneller Zusammenhang zwischen diesen beiden Genen und der Skelettentwicklung
findet sich insofern, als dass PLOD an der Hydroxylierung von Lysin-Resten von Typ-I-
Kollagen beteiligt ist und TNFαR2 eine Funktion bei der Osteoklasten-Physiologie zukommt
(Deveto et al., 1998). Weitere Untersuchungen müssen durchgeführt werden um zu klären, ob
diese Gene für Osteopenie in Frage kommen oder ob und in wie weit MINT in die Erkrankung
involviert ist.
4.4 ”Serial Analysis of Gene Expression” (SAGE)
Die SAGE- Methode (serial analysis of gene expression) basiert im wesentlichen auf zwei
Grundlagen. (1) Ein Sequenzabschnitt von 9-10 Basenpaaren enthält genügend Information,
um ein bestimmtes Transkript eindeutig zu identifizieren, vorausgesetzt es liegt an einer
bestimmten Position innerhalb dieses Gens. (2) Die Konkatemerisierung dieser kurzen
Sequenzabschnitte erlaubt eine sehr effiziente Analyse einer Vielzahl von Transkripten
(Velculescu et al., 1995). Die Durchführbarkeit der Methode wurde zunächst, ausgehend von
humanem Pankreas Gewebe, demonstriert (Velculescu et al., 1995) und es konnte gezeigt
werden, dass im Gegensatz zur Subtraktions-cDNA-Bank bzw. zur Differential Display
Methode auch eine quantitative Aussage bezüglich der isolierten Transkripte gemacht werden
kann. Die Herstellung einer SAGE-Bibliothek, ausgehend von S. cerevisiae, verdeutlichte,
dass mit der Methode die technischen Voraussetzungen geschaffen waren, alle Transkripte
eines bestimmten Organismus zu erfassen und ein sogenanntes Transkriptom zu erstellen
(Velculescu et al., 1997). Im Gegensatz zu dem statischen Genom kann das Transkriptom
durch externe oder interne Faktoren verändert werden und stellt somit ein dynamisches
Bindeglied zwischen dem Genom und seinen physikalischen Merkmalen her (Velculescu,
1999). Durch die Erstellung der Hefe-SAGE-Bibliothek wurden 4665 Gene identifiziert, die
in einer Kopienzahl von 0,3 bis mehr als 200 Transkripten pro Zelle vorkommen.
Überraschenderweise konnten zahlreiche neue Gene nachgewiesen werden, die zuvor durch
Genvorhersageprogramme nicht gefunden wurden. (Velculescu et al., 1997). Weitere
Untersuchungen die, die SAGE-Methode benutzten, konzentrierten sich u. a. auf den
Vergleich des Expressionsprofil von gesunden bzw. Tumor-Gewebe (Zhang et al., 1997), auf
das Expressionsprofil von p53-exprimierenden Zellen (Polak et al., 1997) oder auf das
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