с обл мал

More documents

Recommendations

Info

‘9 (101) декабрь 2016 г. ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА 13 Mayanskaya N.N. – D. Med. Sc., Professor of the Department of Biochemistry, tel. +7-903-061-14-41, e-mail: nmayansk@mail.ru Kravtsova O.A. – Cand. Biol. Sc., Associate Professor of the Department of Biochemistry and Biotechnology, tel. +7-905-312-99-80, e-mail: okravz@yandex.ru In 78 patients with various manifestation rate of atherosclerotic vascular disease is studied the activity of genes expression, products of which are responsible for activation of the antioxidant system AOS. An analysis of gene NQO1 expression that controls the NADP-oxidoreductase synthesis, GCLC gene whose product is involved in the synthesis of glutathione, and HMOX1 gene involved in the modification of free heme, was made. By clinicodiagnostic methods the diagnosis of multifocal atherosclerosis (MFA) (group 1) was confirmed in 48 patients, ischemic heart disease complicated by acute coronary syndrome (ACS) (group 2) ― in 15 patients, and in 15 patients ― without clinical signs of atherosclerosis, but with the presence of risk factors (RF) to develop cardiovascular disease (CVD) (group 3).Gene expression analysis was performed in the control group (10 people), which included patients of the Department of traumatology with no signs of cardiovascular disease. Significant differences in expression of gene HMOX1 in patients with multifocal atherosclerosis, acute coronary syndrome and risk factor without clinical manifestations of cardiovascular disease as compared to the control group (p=0.0000078, p=0.00299 and p=0.012267, respectively) were obtained. The relative expression level of the GCLC gene tends to be low in patients with coronary heart disease complicated by ACS. Differences in the NQO1 gene expression are statistically significant only in the group of patients with coronary heart disease complicated by acute coronary syndrome, and the presence of risk factors for CVD development without clinical signs of atherosclerosis (p=0.03506 and p=0.01331, respectively). Key words: antioxidant system, expression of genes HMOX1, GCLC, NQO1, multifocal atherosclerosis, risk factors, acute coronary syndrome. К настоящему времени сложилось четкое представление об атеросклерозе как о мультифакторном заболевании, с генетической предрасположенностью и целым рядом факторов риска (ФР), которые в совокупности обусловливают нарушение регуляции различных биохимических процессов, приводящих к возникновению данного заболевания. Как известно, в основе развития атеросклероза лежит хроническая воспалительная реакция, о чем свидетельствует волнообразный характер ее течения со сменой фаз обострения и ремиссии. В фазу обострения наблюдается резкое повышение уровня плазменных медиаторов воспаления в сосудистом русле, прогрессирование дисфункции эндотелия, мощная активация клеток-эффекторов воспаления, что приводит к выбросу в сосудистое русло супероксид радикалов, продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), ускорению тромбогенеза и, как следствие этого, к деструкции сосудистой стенки [1, 2]. За этим процессом давно закрепился термин «окислительного или оксидативного стресса». В фазу ремиссии уровень воспалительных медиаторов и активных форм кислорода (АФК) снижается, наступает баланс в кровеносном русле и эндотелии и атерогенные бляшки вместе с содержащимися в них тромбами стабилизируются. Такая последовательность процессов может происходить в стенке любого сосуда, независимо от его локализации, что, несомненно, сказывается на клинической картине заболевания. Именно этот механизм рано или поздно приводит к дестабилизации атеросклеротической бляшки и развитию окклюзирующих осложнений [3]. В настоящее время сформировалась концепция о важной роли окислительного стресса в патогенезе атеросклероза [4, 5], что сопровождается нарушением баланса в системе прооксидантантиоксидант со сдвигом в сторону накопления прооксидантов, к которым, в первую очередь, относят АФК [6]. Одним из важнейших следствий избыточного образования АФК является неконтролируемая в этих условиях активация процессов ПОЛ. Окисление молекул липидов приводит к необратимому изменению мембранных структур клеток и нарушению их проницаемости для ионов. Как известно, для защиты от потенциально патогенных АФК в клетках имеется система защиты [7]. Антиоксидантаня система (АОС) представляет собой разветвленную многокомпонентную сеть физиологически активных веществ, которая условно делится на специфическую и неспецифическую: специфическая АОС, включающая, прежде всего, ферменты: супероксиддисмутазу (СОД), каталазу (КАТ) и глютатионпероксидазу (ГТП), направлена на разрушение образующихся АФК и продуктов их дальнейших превращений, неспецифическая (церулоплазмин, трансферрин, лактоферрин и др.) предотвращает условия и возможности утечки электронов и генерации АФК в ходе окислительновосстановительных реакций (в рамках окислительного фосфорилирования) или в процессе аутоокисления субстратов (микросомальное окисление) [8]. Патогенетические факторы и механизмы дисрегуляции работы АОС при атеросклерозе разной локализации и степени выраженности еще недостаточно исследованы, а результаты исследований носят противоречивый характер. Однако, по-видимому, чувствительность эндогенных антиоксидантов в крови может являться своеобразным индикатором накопления АФК. Окислительный стресс вносит свой вклад в патогенез атеросклероза не только путем стимуляции экспрессии воспалительных генов, но и оказывая мутагенное действие на гены АОС, тем самым ослабляя ее активность. С точки зрения физиологии гены АОС, в частности гены, кодирующие различные изоформы СОД, КАТ и ГТП, могут иметь большое значение в формировании генетически детерминированной предрасположенности к различным клиническим формам атеросклероза (стенокардия, острый инфаркт миокарда, мозговой инсульт) [9]. Таким образом, в настоящее время представляется актуальной комплексная оценка вклада генетических маркеров в изменение активности АОС у пациентов с проявлениями атеросклероза разной локализации и степени выраженности. В связи с этим, целью данного исследования явилось изучение экспрессии регулирующих генов, ответственных за активацию АОС у пациентов с атеросклерозом разной степени выраженности. Материал и методы исследования В исследование включено 78 человек в возрасте от 30 до 75 лет, не состоящих в родстве и сопоставимых по социально-экономическому и этниче- Современные проблемы диагностики в медицине
14 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА ‘9 (101) декабрь 2016 г. скому статусу. Включение больного в исследование осуществлялось после получения информированного согласия, в том числе ― на проведение генетического тестирования. Протокол исследования одобрен локальным этическим комитетом КГМУ Министерства здравоохранения РФ. В зависимости от степени выраженности клинических и морфологических проявлений атеросклероза пациенты были разделены на 3 группы: 1) 48 пациентов, с подтвержденным клинико-диагностическими методами диагнозом мультифокального атеросклероза (МФА); 2) группа больных ИБС, осложненной острым коронарным синдромом (ОКС) (15 чел.); 3) пациенты без клинических признаков атеросклеротического поражения сосудов, но с наличием ФР развития сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) (15 чел.). Критериями исключения служили: тяжелые сопутствующие заболевания, аутоиммунные болезни, диагностированные опухоли, психические заболевания, отказ от генетического тестирования. На каждого больного заполнялась специально разработанная клиническая карта. Группа контроля представлена популяционной выборкой из 10 человек (5 женщин и 5 мужчин), жителей г. Казани, без наследственной отягощенности, ФР и клинических проявлений ССЗ. Обследование контрольной группы включало: измерение АД, антропометрию (рост, вес), социально-демографические характеристики, опрос о курении, потреблении алкоголя (частота и типичная доза), уровне физической активности, оценка липидного профиля (общий холестерин (ОХ), триглицериды (ТГ), липопротеиды низкой и высокой плотности). Выделение тотального препарата РНК проводили из 100 мкл цельной крови, взятой с антикоагулянтом ЭДТА, с использованием TRiZol (Invitrogen, США) согласно инструкции фирмы-производителя. Количественную оценку выделенных образцов РНК проводили спектрофотометрическим методом на NanoPhotometer P360 (IMPLEN, Германия). Для синтеза кДНК проводили реакцию обратной транскрипции с использованием коммерческого набора MMLV RT kit (Евроген, Россия). Анализ экспрессии генов HMOX1, NQO1 и GCLC проводили методом ПЦР в реальном времени на амплификаторе CFX96 (BioRad, США) с использованием коммерческих наборов зондов и праймеров согласно протоколу фирмы-производителя (Applied Biosystems, США). В качестве референтного гена использовали ген бета-актина. Относительный уровень экспрессии генов рассчитывали с использованием метода, предложенного Livak К. и Schmittgen T. [10]. Достоверность различий определялась с использованием непараметрического статистического критерия Стьюдента (t-тeста), различия считались достоверными при р5,5 ммоль/л), отягощенная наследственность (по АГ, ИБС) и абдоминальное ожирение (АО) (табл. 1). Вторая группа была представлена пациентами, по- Таблица 1. Сравнительная характеристика больных в группах Показатель 1-я группа, n=48 чел. 2-я группа, n=15 чел. Современные проблемы диагностики в медицине 3-я группа, n=15 чел. Возраст, годы (m±m) 62,3±7,2 63,4±9,2 60,8±12,9 Мужчины, n (%) Женщины, n (%) 45 чел. (93,75%), 3 чел. (6,25%) 8 чел. (53,3%), 7 чел. (46,7%) 2 чел. (13,3%), 13 чел. (86,7%) Курение 42 чел. (87,5%) 6 чел. (40%) 2 чел. (13,3%) Средние значения ИМТ (кг/м 2 ) (m±m) Гиперхолестеринемия (>5,5 ммоль/л) n (%) Гипертриглицеридемия (>1,7 ммоль/л) n (%) Артериальная гипертензия, n (%) 26,6±3,9 38,14±5,7 29,1±5,2 21 чел. (43,75%) 9 чел. (60%) 9 чел. (60%) 11 чел. (23%) 6 чел. (37,5%) 2 чел. (13%) 33 чел. (68,75%) 9 чел. (60%) 13 чел. (86,7%) ао 12 чел. (25%) 6 чел. (40%) 5 чел. (33%) Компенсированный сахарный диабет (%) 5 чел. (10,4%) 1 чел. (6,7%) 8 чел.(53,3%)
Page 1 and 2: Íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêè
Page 3 and 4: 2 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИ
Page 11 and 12: 10 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕД
Page 13: 12 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕД
Page 65 and 66:
64 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕД
Page 67 and 68:
Page 69 and 70:
Page 71 and 72:
Page 73 and 74:
Page 75 and 76:
Page 77 and 78:
Page 79 and 80:
Page 81 and 82:
Page 83 and 84:
Page 85 and 86:
Page 87 and 88:
Page 89 and 90:
Page 91 and 92:
Page 93 and 94:
Page 95 and 96:
Page 97 and 98:
Page 99 and 100:
Page 101 and 102:
Page 103 and 104:
Page 105 and 106:
Page 107 and 108:
Page 109 and 110:
Page 111 and 112:
Page 113 and 114:
Page 115 and 116:
Page 117 and 118:
Page 119 and 120:
Page 121 and 122:
Page 123 and 124:
Page 125 and 126:
Page 127 and 128:
Page 129 and 130:
Page 131 and 132:
Page 133 and 134:
Page 135 and 136:
Page 137 and 138:
Page 139 and 140:
Page 141 and 142:
Page 143 and 144:
Page 145:
show all

с обл мал

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?