Allgemeine Mikrobiologie

6.13MikrobiologischeDiagnostik 189
6.13 MikrobiologischeDiagnostik
Eine wichtige Aufgabe des Mikrobiologen ist die Identifizierung von
MikroorganismenausderNaturoderausklinischemMaterial;siewird
voralleminklinisch-diagnostischenLaborsingroßemUmfangbetrieben.
Zur Identifizierung sind zahlreiche Tests erforderlich, die nur in ihrer
Gesamtheit eine eindeutige Einordnung eines Neuisolats bzw. eines
klinisch relevanten Keims erlauben. Naturgemäß ist der Aufwand für
dieIdentifizierungeinesNeuisolatsmitneuen,ungewöhnlichenEigenschaftenundseineEinordnungindasbestehendetaxonomischeSystem
wesentlich größer als die Identifizierung eines prinzipiell bekannten
Bakteriums im klinischen Routinelabor. Dafür müssen zumeist nur
wenigeEigenschaftengeprüftwerden.
6.13.1 KlassischeTechniken
FürdieIdentifizierungnachklassichenTechnikenmusseineReinkultur
vorliegen.HierzuwerdenWachstumstestsaufnichtselektivenNährböden
durchgeführt.DiegewachsenenKolonienwerdensowohlvisuellgeprüft
alsauchhinsichtlichderZellform,Sporenbildungetc.mikroskopischkontrolliert.ZellformenvariierengelegentlichabhängigvomjeweilsverwertetenSubstratundvonderWachstumsphase;hierbeiistdieZellbreite
typischerweisewenigbeeinflußt, währenddie Zelllängedurchaus veränderlichist(vgl.Box6.3).
DieZuordnungzumGram-TypgeschiehtüberdieklassischeGram-
Färbung(Kap.5.1.1),dieimmerimunmittelbarenVergleichmiteinem
gramnegativen und einem grampositiven Kontrollorganismus durchgeführtwerdenmuss.SiekannaberauchdurchBehandlungeinerKolonie
mit3%KOH-Lösungerfolgen.BeigramnegativenZellentrittnachdieser
BehandlungdieDNAausundlässtsichmiteinerImpfösealsfädig-viskoserSchleimsichtbarmachen,währendbeigrampositivenkeinesolche
Schleimbildung zu beobachten ist. Die endgültige Zuordnung zu den
gramnegativenodergrampositivenBakterienistgelegentlicherstnach
derelektronenoptischenUntersuchungeinesUltradünnschnittsderZellwandmöglich.WeiteremorphologischeKriteriensindeventuelleSporenbildungoderGeißeln,diedurchPräzipitationvonTanninenoderSchwermetallen(Silber-oderQuecksilbersalze)angefärbtwerdenkönnen.
In der Routinediagnostik im medizinisch-klinischen Labor richtet
sich das Interesse auf einen relativ kleinen Kreis klinisch relevanter
Organismen,diezumeistmitHilfewenigerTestshinreichendsicheridentifiziertwerdenkönnen.HierzuzählenvorallemdiverseFärbetechniken
sowie die Analyse des Spektrums der genutzten Substrate, die heute
aufStandardnährbödenweitgehendautomatisiertdurchgeführtwerden
kann (z. B. BIOLOG-System). Die Verwertung verschiedener Substrate
wird durch sogenannte chromogene Substrate einfach nachgewiesen.
Diessindz.B.Zucker,dieaneineno-Nitrophenylrestgekoppeltsind.Bei
derHydrolysewirddasfarbigeNitrophenolfreigesetztundliefertdamit
einenIndikatorfürdieSubstratverwertung.
EinzelneBakterienkönnengegenüberanderenmitspezifischenIndikator-Nährmediendifferenziertwerden;dieswirdamBeispielderDifferenzierungvonE.colialsFäkalindikatorgegenüberanderenEnterobakterienausführlichinKapitel12dargestellt.DieseTechnikensetzenvoraus,
dassdiejeweiligenZielorganismenproblemlosanwachsenundnichtz.B.
durchvorhergehendeAushungerungoderzugesetzteSelektionssubstanzenbeeinträchtigtsind.
Box6.3 DieklassischeBakteriendiagnostik
Die klassische, kultivierungsbasierte Identifizierung
von Mikroorganismen hat den
Vorteil, dass sie denjeweilig angezüchteten
Keim auch für weitere Untersuchungen zur
näheren Spezifizierung verfügbar macht.
Nachteil dieser amtlich vorgeschriebenen
TechnikenistdievergleichsweiselangeZeitdauer
von mehreren Tagen, die mit dem
Anwachsen der Bakterien und der DurchführungderDifferenzierungstestsverbunden
ist.
Aus Fuchs, G. : Allgemeine Mikrobiologie (ISBN 978-313-444608-1) © Georg Thieme Verlag KG 2007
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