Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

92 ERGEBNISSE
Abb. 27 : Coomassie-gefärbte 2D-Gele von E. coli MG1655 (A, siehe vorherige Seite) und YYC202
(B) . 300 gg lösliche Proteine wurden unter Verwendung von WG-Strips mit einem pH-Gradienten von
4 - 7 isoelektrisch fokussiert und anschließend in einer SDS-PAGE der Größe nach aufgetrennt . Die
markierten Proteinspots wurden durch MALDI-TOF-Massenspektrometrie analysiert . Die Proteine mit
den Spot-Nr . 1 - 15 zeigten in YYC202 eine stark reduzierte Intensität oder fehlten völlig, die Proteine
mit den Spot-Nr . 16 - 17 wiesen dagegen eine erhöhte Intensität in YYC202 auf .
8 .2 Vergleich des Proteinmusters von E. coli YYC202ldhA zu unterschiedlichen
Zeitpunkten einer Fed-Batch-Fermentation
8 .2 .1 Fed-Batch-Fermentation unter acetatlimitierenden Bedingungen
In Vorversuchen durch B . Zelié (IBT2) war gezeigt worden, dass die C02-Produktion bei
der Fermentation von YYC202 in Minimalmedium mit Glucose und Acetat proportional zum
Acetat-Verbrauch war . Mit Hilfe der online gemessenen C0 2-Konzentration im Abgas konnte
der Acetat-Zugabe so reguliert werden, dass Acetat limitierend war oder im Überschuss
vorlag . Um die Veränderung des Proteinmusters in E. coli YYC202ldhA im Verlauf einer
Acetat-limitierten Fermentation festzustellen, wurden zu drei verschiedenen Zeitpunkten
während der Fermentation (wurde von B . Zelié, Institut für Biotechnologie 2 durchgeführt)
Proben genommen : zu Beginn der Pyruvat-Produktionsphase nach 8 h (40 mM Pyruvat im