Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

84 ERGEBNISSE
In der Gen-Gruppe mit erhöhtem RNA-Level in YYC202-pGS87 sollten alle durch pGS87
kodierten E. coli-Gene enthalten sein (Teile von pdhR, aceE, aceF, lpdA, yacH und Teile von
acnB), jedoch zeigte nur aceF das erwartete Ergebnis . Im Fall von lpdA (21,4 ± 12,9) und
acnB (4,7 ± 2,6) wurden zwar ebenfalls erhöhte RNA-Level gefunden, die p-Werte lagen
jedoch >0,05 aber 0,2, so dass man den
mRNA-Leveln von 1,97 ± 1,49 bzw . 3,76 ± 3,42 nicht trauen kann . Das pdhR-Gen zeigte
trotz der erhöhten Kopienzahl ein RNA-Verhältnis nahe eins (0,85 ± 0,02, p-Wert 0,000) .
Ebenso wie im vorhergehenden Stammvergleich zeigten wieder viele Gene aus der
Flagellenbiosynthese und der Chemotaxis einen erhöhten RNA-Level in YYC202-pGS87 .
Von den Genen, die für die Chemotaxis eine Rolle spielen, war nur cheY auswertbar . Alle
anderen Gene (cheABRWZ) zeigten zwar ebenfalls eine erhöhte Expression, wurden aber
aufgrund ihres p-Wertes (>0,09) als nicht signifikant verändert angesehen. Von allen
48 Genen, die an der Flagellen-Biosynthese und Bewegung beteiligt sind, zeigten 36 Gene ein
Verhältnis >2 . Ebenso wie in dem vorhergehendem Stammvergleich zeigt auch das ndh-Gen
für die NADH-Dehydrogenase einen erhöhten RNA-Level in YYC202-pGS87 (5,07 ± 2,5),
allerdings lag der p-Wert bei 0,07 .
Tab . 17 : Gene, für die mindestens eine 2-fache Erhöhung bzw . Verringerung des mRNA-Levels beim
Vergleich zwischen YYC202-pGS87 (Y-pGS87) und Wildtyp (MG1655) bei Kultivierung in
Minimalmedium mit 10 mM Glucose und 2 mM Acetat gemessen wurde . Die Werte stellen Mittelwerte
aus zwei unabhängigen Messungen dar . Es wurden jeweils separate Kulturen verwendet . UE =
Untereinheit, DH = Dehydrogenase
B Gen Funktion relativer mRNA-Level p-Wert
(Y-pGS87/MG1655)
Galactitol-Stoffwechsel
b2091 gatD Galactitol-l-P-DH (Galactitol-l-P + NAD+ -->
L-Tagatose-6-P + NADH) ; liegt im
gatYZABCD-Operon
0,43 ± 0,09 0,047
b2093 gatB galactitolspezifisches IIB-Enzym des PTS-
Systems
0,60 ± 0,08 0,040
b2094 gatA galactitolspezifisches IIA-Enzym des PTS-
Systems
0,06 ± 0,02 0,022
b2095 gatZ putative Tagatose-6-P-Kinase (ATP + D- 0,07 ± 0,01 0,004
Tagatose-6-P -->
bisphosphat)
ADP + D-Tagatose-1,6-
b2096 gatY Tagatose-Bisphosphate-Aldolase 1 (D-
Tagatose-1,6-bisphosphat -->
Dihydroxyaceton-P + D-Glycerinaldehyd-3-P)
0,38 ± 0,05 0,019