Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 5 1
0 5 10 15 20
Zeit (h)
Abb . 12 : Glucose-Verbrauch (") und Pyruvat-Bildung (A) durch eine Zellsuspension von YYC202
(OD 600 = 0,75,(0)) in einem Puffergemisch (je 50 mM MES, MOPS, und TRICINE, eingestellt auf pH
7) mit 8 mM Glucose .
Tab . 10 : Pyruvat-Ausbeute durch YYC202-Zellsuspensionen in Abhängigkeit vom pH-Wert . In
Glucose-Minimalmedium mit Acetat kultivierte Zellen wurden in 0,9 % NaCI gewaschen und in einem
Puffer aus 50 mM MES, 50 mM MOPS und 50 mM TRICINE mit -10 mM Glucose zu einer OD600 von
1 resuspendiert (50 ml Zellsuspension in 500-ml-Erlenmeyer-Kolben mit zwei Schikanen) und bei
37C und 160 U .p.m . inkubiert . Während der Experime nte sank der pH-Wert jeweils um 0,4 Einheiten .
Die Glucose wurde aber vollständig verstoffwechselt . Die Werte stellen Mittelwerte aus drei
unabhängigen Experimenten dar .
16 1 .6
14 1 .4
E 12 1 .2
> 10 1 .0 0
2 0
ûi
0
U
C3
6
4
0 .6
0 .4
2 0 .2
0 0 .0
pH Pyruvat-Ausbeute [Mol Pyruvat/Mol Glucose]
6,0 1,84 ± 0,07
6,5 1,87 ± 0,06
7,0 1,83 ± 0,15
7,5 1,51 ± 0,15
8,0 1,50 ± 0,14
3.2 Einfluss der Zelldichte auf die Pyruvat-Produktion durch Zellsuspensionen
In weiteren Versuchen wurde der Einfluss höherer Zelldichten auf die Glucose-Umsetzung
untersucht . Dabei zeigte sich, dass bei einer achtfachen Erhöhung der OD600 von 0,7 auf 5,8
die spezifische Glucose-Verbrauchsrate annähernd konstant blieb (circa 0,25 gmol min 1 (mg
Protein) -1 ), dass jedoch bis zur vollständigen Umsetzung der Glucose (10 MM) außer circa 7
mM Pyruvat auch circa 7 mM Lactat gebildet wurde (Abb . 13) . Das Lactat wurde in der Folge
langsam wieder zu Pyruvat umgesetzt . Dies deutet darauf hin, dass es bei hohen Zelldichten