Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 53
die Puffer-Kapazität von 0,2 M MOPS nicht ausreichte . Der pH sank von anfänglich pH 7 auf
pH 5 und als Folge davon kam es zu einem Stop der Glucose-Umsetzung . Es wurden nur etwa
68 mM der zugesetzten Glucose umgesetzt. Außer 50 mM Pyruvat wurden 31 mM Lactat
gebildet, das aber anders als bei den vorher beschriebenen Experimenten nicht wieder zu
Pyruvat umgesetzt wurde . Für die in Abb . 14 dargestellten Versuche wurden die Zellen in
0,5 M bzw . 1 M MOPS-Puffer pH 7 mit -100 mM Glucose suspendiert, und zwar zu einer
OD6 00 von 7 . Bei Verwendung von 0,5 M bzw . 1 M MOPS-Puffer kam es zwar auch zu einer
Ansäuerung auf pH 6,3, die Glucose wurde aber vollständig verstoffwechselt . Die Rate der
Glucose-Umsetzung war in 1 M MOPS auf 20 % der Rate in 0,5 M MOPS reduziert
(Tab . 11), d .h. die hohe MOPS-Konzentration hemmte den Stoffwechsel bzw . einzelne der
beteiligten Reaktionen beträchtlich .
Die Pyruvat-Ausbeute in 0,2 M, 0,5 M und 1,0 M MOPS-Puffer lag bei 0,8, 1,2 und
1,2 Mol Pyruvat/Mol Glucose . Unter der Annahme, dass das gebildete Lactat wieder zu
Pyruvat umgesetzt werden kann, liegen die Ausbeuten bei 1,2, 1,3 und 1,5 Mol Pyruvat/Mol
Glucose . Das bedeutet, dass ein beträchtlicher Teil der Glucose zu einem anderen
unbekannten Produkt umgesetzt wurde . Ein nachfolgender Versuch in einem Fernenter
deutete darauf hin, dass nur ein Bruchteil des fehlenden Kohlenstoffs als C02 freigesetzt
wurde .
160
120
80
40
0
A - B
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80
Zeit (h) Zeit (h)
Abb. 14 : Glucose-Verbrauch (") sowie Pyruvat- (A) und Lactat-Bildung (A) durch Zellsuspensionen
von YYC202 (OD6oo = 7) in 0,5 M MOPS-Puffer pH 7 (A) und 1 M MOPS-Puffer pH 7 (B) mit -100mM
Glucose . Die Suspensionen (50 ml) wurden in 500-ml-Erlenmeyer-Kolben mit 2 Schikanen bei 37C
und 160 U.p .m . inkubiert . De r pH-Wert sank in beiden Versuchen von pH 7 auf pH 6,3 .
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100