Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

100 ERGEBNISSE
Transaldolase, ebenfalls ein Enzym des Pentosephosphat-Wegs, sank ebenfalls geringfügig .
Bei den Citratzyklus-Enzymen wurden Intensitätsänderungen bei Aconitase B, Isocitrat-
Dehydrogenase und Malat-Dehydrogenase beobachtet, und zwar reduzierte sich in allen
Fällen die Intensität . Aconitase B wurde in zwei Spots (Nr . 45 und 49) mit annähernd gleicher
Masse, aber einem pl-Unterschied von etwa 0,1 identifiziert . Eine Phosphorylierung von
Aconitase B als mögliche Erklärung für das Auftreten der beiden Spots wurde bisher nicht
beschrieben .
Es gab eine Vielzahl von Proteinen, die bei beiden Fermentationen gleiche Veränderungen
aufwiesen (Tab . 21), z.B . Argininosuccinat-Synthase, das Leu/Ile/Val-Bindeprotein,
Methioninadenosyl-Transferase oder Acetohydroxsäure-Isomeroreduktase . Weitere Proteine,
wie das Histidin-Bindeprotein, Isopropylmalat-Dehydrogenase, Isopropylmalat-Isomerase,
Tetrahydropteroyl-triglutamat-Methyltransferase oder Threonin-Synthase änderten nur in der
acetatakkumulierenden Fermentation ihre Intensität . Alle diese Proteine nahmen im Verlauf
der Fermentation ab .
Im Gegensatz zur acetatlimitierten Fermentation konnten in den Zellen der
acetatakkumulierenden Kultur die Glutamat-Decarboxylase an zwei Positionen (Spot-Nr. 22
und 51) mit etwa der gleichen Masse, aber einem pl-Unterschied von -0,1 identifiziert
werden . E. coli besitzt zwei Glutamat-Decarboxylase-Isoenzyme GadA und GadB . Sie
unterscheiden sich zwar nur in fünf Aminosäuren, dies führt jedoch zu einem pl-Unterschied
von 0.07 (GadA pl 5,06 ; GadB pl 5,13) . Für den Spot Nr . 22 konnte gezeigt werden, dass es
sich um GadA handelt, da ein unvollständig verdautes Peptid mit der Masse 1564 Da
(Sequenz : LLTDFRSELLDSR) detektiert wurde, welches in GadB nicht vorhanden ist . Die
Intensität von GadA halbiert sich etwa im Verlauf der Fermentation . Im Fall von Spot-Nr . 51
war aufgrund des Peptidmassenfingerprints keine eindeutige Zuordnung zu GadA oder GadB
möglich, der höhere pl spricht jedoch eindeutig dafür, dass es sich dabei um GadB handelt .
Im Gegensatz zu GadA stieg die Intensität von GadB im Verlauf der Fermentation . Dies
deutet darauf hin, dass die Expression von gadA und gadB unterschiedlich reguliert wird .
Der Trigger-Faktor Tig, der sowohl als Chaperon als auch als Prolyl-Isomerase fungiert,
wurde ebenfalls in zwei Spots (Nr . 28 und 33) identifiziert, die einen pl-Unterschied von etwa
0.15 aufwiesen. Da die Masse von Spot 33 etwas kleiner zu sein schien als die von Spot 28,
könnte der pl-Unterschied auf einer proteolytischen Spaltung beruhen . Eine Phosphorylierung
von Tig wurde bisher nicht beschrieben, im Gegensatz zu den Chaperonen GroEL und DnaK
(McCarty & Walker, 1991 ; Sherman & Goldberg, 1994) . Beide Tig-Spots nahmen im